אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 4:44 דק׳ • July 8th, 2025
התחל בהנחת עכבר מורדם במצב שכיבה. נתח את חלל בית החזה כדי לדמיין את הלב. השתמש בפיפטור המצויד בקצה קדח רחב כדי להפעיל לחץ יניקה ולשאוב את הלב מגוף העכבר לקצה. כרתו את הלב באבי העורקים כדי לקצור אותו מגוף העכבר.
טבלו את הלב המבודד בכוס המכילה בופר עשיר בחומרים מזינים בתוספת חומר נוגד קרישה. נוגד הקרישה במאגר יוצר קומפלקס עם סידן הקיים בקרדיומיוציטים - תאי שריר הלב, מפסיק את התכווצות שרירי הלב ומונע קרישת דם.
לאחר מכן, הניחו את קודקוד הלב כלפי מטה על מעמד לב השמור בצלחת פטרי המכילה חיץ מתאים. מהדקים את אבי העורקים מעל הפרוזדורים ומעבירים את הלב המהודק לצלחת זלוף.
לאחר מכן, קח מכלול מחט מזרק המכיל מאגר זלוף מתאים. הכנס את המחט לחדר השמאלי החודר לחדר החדר.
כאשר אבי העורקים מהודק, הזרקה תוך חדרית לוחצת על שסתומי אבי העורקים לפתיחה. כתוצאה מכך, המאגר שוטף דם מראש דרך העורקים הכליליים, ומחדיר היטב את שרירי הלב. לבסוף, המאגר חודר דרך ורידי הריאה. זה מספק לב שהשתמש בהצלחה עבור יישומים במורד הזרם.
לקצירת לב עכבר, לאחר אישור המתת חסד וגילוח הבטן, פתח את חלל בית החזה במהירות כדי לחשוף את הלב, והשתמש בפיפטה מפלסטיק עם קצה חתוך בערך לגודל הלב, כדי למצוץ את הלב לתוך הפיפטה. הרם את הפיפטה כדי ליצור מספיק מקום להכנסת מספריים מעוקלות, והשתמש במספריים כדי לכרות את הלב מהצד הגב, תוך הקפדה על פגיעה בפרוזדורים.
מיד, הכניסו את הלב לכוס זכוכית של 30 מיליליטר המכילה CIB EGTA קר כקרח למשך כדקה אחת. כאשר הצירים פסקו, הניחו את הלב בצלחת תרבית של 35 מיליליטר המכילה CIB EGTA קר כקרח, והסירו את הריאה ורקמות גלויות אחרות.
הנח את הלב הנקי בגסות על מעמד לב מלא ב-CIB EGTA צונן, קודקוד כלפי מטה, והנח את המעמד מתחת למיקרוסקופ סטריאוסקופי. הסר את השומן ורקמות החיבור מסביב לאבי העורקים. אם אורך אבי העורקים החתוך ארוך מדי, חתוך את אבי העורקים ממש מתחת לעורק הברכיוצפלי, וכוון את הלב כך שהמשטח הקדמי פונה קדימה. השתמש בפינצטה כדי להרים את קצה אבי העורקים, והשתמש בכלי דם קטן clamp כדי להדק את אבי העורקים ליד הפרוזדורים, תוך דחיפה עדינה כלפי מטה על הפרוזדורים.
לאחר מכן, הניחו את הלב המהודק על צלחת זלוף, כשהצד הקדמי פונה כלפי מעלה, והרטיב את הלב בכמה טיפות CIB EGTA. לזלוף מקדים, טען מזרק של 20 מיליליטר המכיל CIB EGTA מחומם מראש המחובר לצינור הארכה גמיש ומחט הזרקה מסומנת, על משאבת העירוי, והפעל את המשאבה בקצב זרימה של 0.5 מיליליטר לדקה. לאחר מילוי המחט והמשאבה, הנח את מחט ההזרקה על צלחת הזילוף, כשהצד הקצר יותר של הצורה האלכסונית מלפנים, והחלק את המחט עד שהיא רק נוגעת בקודקוד הלב.
בזהירות, הכנס את המחט ליד קודקוד החדר השמאלי, לחדר החדר מבלי לסובב או לנתק את המחט מהצלחת, תוך התבוננות בסימן כדי להעריך את עומק החדרת המחט. לאחר השלמת החדרת המחט, הדם אמור להתחיל לזרום מהעורק הכלילי.
השתמש בסרט כדי לקבע את מחט ההזרקה לצלחת ולהגדיל את מהירות המשאבה ל-1 מיליליטר לדקה. אם הלב מוזרם בהצלחה, זרימת המאגר בנימים צריכה להיות גלויה ממש מתחת לאפיקרדיום.