קיבוע לחץ של מסתם ריאתי מורין מבודד: הליך לבידוד ותיקון כימי של המסתם הריאתי של העכבר בקונפורמציה סגורה

כדי להתחיל, אבטח עכבר שעבר המתת חסד במצב שכיבה. חתך לרוחב דרך דופן בית החזה כדי לגשת לחלל בית החזה ולחשוף את הלב. כרתו את הפרוזדור הימני והזריקו מי מלח לחדר השמאלי כדי לנקז דם מהלב.

נתק את קשרי כלי הדם על ידי ניתוק כלי הדם העיקריים. יתר על כן, חתכו את עורק הריאה במרחק מתאים מצומת הבטן-עורק, המשמש כצינור ללחץ. הסר את החדרים כדי לחשוף את צד החדר ללחץ אטמוספרי.

כעת, אבטח צינור לחץ לעורק הריאה, והבטיח מרווח הולם בין צומת הבטן-עורקי לקצה הצינור כדי לאפשר לעלוני השסתום לנוע במהלך הלחץ.

לצינור, חבר את המאגר המלא במי מלח הקבוע לגובה מחושב ביחס לשסתום הריאתי בהתבסס על הלחץ ההידרוסטטי הרצוי שיופעל על הצד העורקי של השסתום. הזרימה החד-כיוונית מהצד העורקי עם הלחץ ההידרוסטטי המופעל גורמת לסגירת עלוני השסתום ולהתנפחות של תא המטען הריאתי.

לאחר מכן, הכניסו קיבוע מתאים למאגר והמשיכו את הזילוף. הקיבוע המחולל מייצב את המורפולוגיה התאית ואת ארכיטקטורת הרקמות.

הניחו גזה ספוגה בקיבוע על הרקמה כדי לקבע את הרקמה המקיפה את המסתם ולמנוע התייבשות. אחסן את שסתום הלב הקבוע בקיבוע עד לשימוש.

התחל בחיטוי הכלים הדרושים לדיסקציה של העכבר, כולל מספריים עדינים, מיקרו מלקחיים, מהדקים מיקרו-וסקולריים, מהדק מריחת מלקחיים, מחזיקי מיקרו-מחטים, מספריים קפיציים ומחזירים.

לאחר המתת חסד של עכבר C57 Black 6 בוגר, הנח אותו בתנוחת שכיבה גבית על מגש, אבטח את גפיו עם סרט ובצע את כריתת בית החזה. חשפו את הלב על ידי הסרת עודפי רקמת שומן ופאשיה, ואז הסירו את הפרוזדור הימני וחדרו את החדר השמאלי בתמיסת מלח בטמפרטורת החדר.

הסר את הלב כולו על ידי ניתוק הווריד הנבוב העליון, הווריד הנבוב התחתון, עורק הריאה ואבי העורקים, וחתוך כ-2 מילימטרים מעל צומת הווריד הבטני-עורקי, שישמש כצינור ללחץ.

הסר את החדר השמאלי והימני כדי לחשוף את התאים ללחץ אטמוספרי, וודא שמבנה תא המטען הריאתי אינו מושפע מהסרת החדרים. צינורות לחץ אנסטומוז עם עורק הריאה, ומשאירים מרחק של כמילימטר בין הצומת הסינו-צינורי לקצה הצינור, כדי להתאים לתנועות גדולות של העלונים וגזע הריאה.

הרם את המאגר ללחץ פיזיולוגי מקביל ומלא אותו בתמיסת המלח. בדוק את מערכת הזרימה כדי לוודא שאין סתימות או בועות אוויר. חבר תא עצירה לשסתום הריאתי האנסטומוס, והבטח זרימה נאותה דרך הצינור על ידי החלפת דרכי הזרימה. לאחר שהזרימה מספקת, העבירו את הזרימה היוצאת לשסתום הריאתי האנסטומוס, והקפידו על לחץ של תא המטען הריאתי, המזוהה על ידי נפיחות תא המטען.

לאחר אישור הלחץ של תא המטען הריאתי, יש לשלב בהדרגה תמיסת קיבוע ראשונית, עד לטיהור 25% מקיבולת המאגר של תמיסת המלח. הניחו גזה ספוגה בקיבוע על דגימת הרקמה כדי למנוע ייבוש. יש להחדיר את הקיבוע למשך 3 שעות, למלא מחדש את המאגר כדי לשמור על לחץ קבוע.

לאחר הזלוף, יש לאחסן את שסתום הלב בתמיסה המקבעת בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש, עד שבוע.