מודל Mouse Ileal Loop: מודל כירורגי לחקר חדירות המעי בעכבר

בתנאים פתולוגיים, התפוררות מחסומי האפיתל והאנדותל מגבירה את חדירות המעי, וגורמת לתוכן המעי לדלוף לכלי הדם ולחלל הבטן שמסביב. ניתן לדמות את חדירות המעי באמצעות מודל לולאה איליאלית.

כדי להתחיל, הכינו עכבר מורדם במצב שכיבה. בצע חתך בקו האמצע בבטן. הניחו גזה כותנה סטרילית לחה עם חיץ מתאים מעל אזור הניתוח כדי לשמור על לחות האיברים במהלך הניתוח.

הוציא את האילאום - החלק הדיסטלי של המעי - ופזר אותו על הגזה כדי לחשוף את המזנטריה. זהה שני אתרי קשירה באילאום המרווחים כראוי במזנטריה ונטולי כלי דם קריטיים. לאחר מכן, נקב את המזנטריה כדי להוסיף ליגטורות באתרים שזוהו.

לאחר מכן, נתח את האילאום כדי ליצור לולאה איליאלית מבודדת עם אספקת דם שלמה וממברנה מזנטרית. לאחר מכן, הזריק חיץ מתאים ללולאה כדי לשטוף את תכולת הפסולת.

כעת, קשרו את הקצוות הפתוחים של הלולאה האילאלית. השתמש במזרק כדי להזריק כימוקין - תרחיף חלבון כימוטקטי - לתוך הלולאה, ולגרום לה להתנפח. החזר את האיברים לבטן.

לתפור את החתך. אפשר לעכבר להתאושש. בסופו של דבר, מולקולות הכימוקין עוברות דרך הדופן האילאלית לכלי הדם הסמוכים, וגורמות לדלקת ולזרם לויקוציטים.

לאחר השגת מישור הרדמה כירורגי, התחל בקרצוף פרוות קו האמצע של הבטן עם ספוגיות אלכוהול, או ספוג גזה ספוג באתנול 70%. אין להרטיב שטח רחב של פרווה באלכוהול כדי למנוע היפותרמיה. בעזרת מספריים, בצע לפרוטומיה בקו האמצע. בצע חתך אופקי באמצע הבטן, וחשוף את הצפק, הקפד לא לפגוע באיברים תוך בטניים.

הניחו גזה כותנה רטובה חתוכה מראש על החלל התוך-בטני החשוף. השתמש במקלוני צמר גפן רטובים כדי לגייס ולהוציא את הקקום, והנח אותו בזהירות על גזה כותנה רטובה. לאחר מכן, גייסו והחוצי בעדינות את האילאום. פרוס לפחות 6 סנטימטרים של אילאום טרמינלי על גזה כותנה רטובה מבלי לשבש את כלי הדם המזנטרי ואת אספקת הדם.

שמור על הרקמות החשופות לחות בכל עת עם HBSS חם. זהה את העורק הראשי המספק את האילאום במזנטריה קרוב לצקום. לאחר מכן, אתר שני אתרי קשירה במזנטריה שאינם מכלי דם קריטיים. תפסו בחוזקה את האילאום הסופי בעזרת מלקחיים קהים של רקמות והשתמשו במלקחיים עדינים כדי לחגור את המזנטריה, תוך הימנעות מכלי דם.

הנח תפר משי על פני הנקב וקשר קשר כירורגי ליצירת הקשירה הראשונה. השתמש בסרגל כדי למדוד מרחק של 4 סנטימטרים מהליגטורה הראשונה, וצור את ליגטורה השנייה. חותכים בזהירות ליד כל קשירה במספריים עדינים כדי לבודד את הלולאה האילאלית של 4 סנטימטרים, תוך שמירה על אספקת הדם והקרום המזנטרי שלמים.

שטפו בעדינות את התוכן של מקטע הלולאה האילאלי עם HBSS חם באמצעות צינור הזנה צהוב גמיש המחובר למזרק של 10 מיליליטר. הקפד לשטוף את תוכן הלומינל מחלל הבטן כדי לשמור על ניקיון אתר הניתוח. קשרו את שני הקצוות החתוכים של לולאת האילאל הסמוקה בתפר משי.

השתמש במזרק של 1 מיליליטר עם מחט בגודל 30 כדי להזריק לאט 250 מיקרוליטר של ריאגנט, כגון FITC-dextrans או כימוקין ללומן המעי. הלולאה האילאלית תתנפח ותגרום לנפיחות מתונה של הרירית.

סגור את דופן הבטן באמצעות מחזיק מחט, מלקחיים אנטומיים ותפרי משי 3.0 שאינם נספגים בעזרת מחט חיתוך הפוכה. לאחר ייבוש החיה למניעת היפותרמיה, הניחו אותה בתא הרדמה מווסת טמפרטורה לתקופת הדגירה.