אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:57 דק׳ • July 8th, 2025
אנדופתלמיטיס חיידקית היא מחלת עיניים דלקתית המתרחשת כאשר Bacillus cereus - חיידק פתוגני - מדביק את האזור התוך עיני.
כדי לכמת את הזיהום החיידקי, הנח מודל עכבר שעבר המתת חסד של אנדופתלמיטיס חיידקית לרוחב על שולחן ניתוחים. יש להפעיל לחץ עדין מתחת לעין כדי לסייע בניתוק גלגל העין מהשקעה. העבירו את גלגל העין לתוך שפופרת המכילה חוצץ מתאים בתוספת קוקטייל מעכב פרוטאז.
הומוגניזציה של רקמת העין כדי לפרק אותה, לשחרר חיידקים בתרחיף. מעכבי הפרוטאז הקיימים במאגר משביתים את הפרוטאזות התאיות המשוחררות כדי לשמור על כדאיות החיידקים. לאחר מכן, יש לדלל באופן סדרתי את תרחיף החיידקים כדי לקבל ריכוזים שונים של Bacillus cereus.
קח צלחת תרבית זוויתית המכילה את מדיום האגר המועשר ותוחם שורות המתאימות לכל ריכוז דילול. יש להוציא כמה טיפות מהתרחיף החיידקי בחלק העליון של השורה המיועדת ולאפשר לו לזרום למטה עד שהוא מגיע לקצה הצלחת, מה שמסייע בהתפשטות אחידה של חיידקים. משטחים את הצלחת ודוגרים.
במהלך הדגירה, כל חיידק משתמש בחומרי המזון מהאגר כדי להתרבות וליצור מושבות בודדות. מספר המושבות פוחת, המקביל לעלייה בדילול התרחיף החיידקי. ספרו את מספר המושבות בשורה מסוימת כדי לכמת את עומס החיידקים בעין.
בנקודת הסיום הניסוי המתאימה, הוסיפו 400 מיקרוליטר של PBS בתוספת מעכב פרוטאז בצינור קציר אוטוקלאב אחד לכל עין על קרח, והניחו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים