JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 3:37 דק' • July 8th, 2025
מוח החולייתנים מכיל מערכת חילופי נוזלים מיוחדת המקבילה למערכת הלימפה, הנקראת המערכת הגלימפטית. במערכת זו, נוזל מוחי או CSF נכנס לחללים הפרי-עורקיים, ומאפשר חילופי מומסים דרך תעלות מיוחדות הקיימות בכפות הרגליים האסטרוציטיות. ה-CSF הנושא את המומס זורם לחלל הוורידי כדי לשטוף את המומסים מהמוח. מסלול זה משמעותי לפיזיולוגיה של המוח וניתן לדמיין אותו באמצעות מולקולות מעקב פלואורסצנטיות.
כדי להתחיל, הכינו חזיר מורדם במצב נוטה כשראשו מכופף כלפי מעלה. בצע חתך מתחת לפסגת העורף. החזר את השרירים כדי לחשוף את בור המים מגנה - פתח בחלל התת-עכבישי בין המוח הקטן למדולה אובלונגטה.
הכנס בזהירות צינורית דרך הדורה מאטר לתוך בור המים המגנה. מרחו דבק שיניים סביב הצינורית. הניחו לו להתקשות. לאחר מכן, הזרקו מולקולות מעקב פלואורסצנטיות תלויות ב-CSF מלאכותי בקצב מתאים. תמיסת מעקב פועמת בבסיס הצינורית מאשרת אספקה מוצלחת.
לאחר ההזרקה יש למקם מחדש את שכבות הרקמה ולתפור את החתך. הניחו גזה כותנה רטובה מעל החתך כדי להגביל את אובדן החום. אפשר למולקולות העוקב להסתובב לתקופה הרצויה. כאשר מדמיינים אותם תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, מולקולות מעקב עוזרות לדמיין את התפלגות ה-CSF במערכת הגלימפטית.
ודא שאדם אחד מרים ומכופף את הראש והצוואר של החיה, בעוד השני ממשש את בור המים, ורושם את מיקומו האנטומי. הכניסו צינורית בגודל 22 לאט ובזהירות לבור המים דרך הדורה, בזווית אלכסונית לציר האורך. לאחר מכן, משוך את המחט מהצינורית והניח מכסה על המנעול.
התחל במריחת דבק-על ומאיץ שבו הצינורית נכנסת לרקמה. לאחר מכן, מרחו את המלט הדנטלי. המתן חמש דקות עד שהמלט יתקשה. הסר את הכובע בזהירות מהצינורית. חבר את הצינורית לקצה הזכרי של ברז קו העירוי עם העוקב באמצעות הארכה של 10 סנטימטרים.
הזרקו את העוקב לאט בקצב של 100 מיקרוליטר לדקה ביד או באמצעות משאבת מיקרו-עירוי. הסר את ברז קו העירוי והחלף אותו במכסה. בדוק אם העוקב גלוי, פועם בבסיס הצינורית. לאחר מכן, הניחו שקי חול מתחת לצוואר החיה כדי לשמור על כיפוף מסוים.
שחרר את הראש והשאיר את החיה במצב מנוחה ושכיבה. שחרר את המחזירים השומרים על עצמם והחלף את השרירים. השתמש במגבת הכירורגית clamps כדי לקרב את העור מעל השרירים. תחילה השתמש בגזה, ולאחר מכן, בשמיכה לכיסוי מהדקי המגבת והחתך כדי להגביל את אובדן החום. אפשר לעוקב להסתובב למשך הזמן הרצוי.