בידוד תאי IPE ו-RPE: טכניקה להשגת תאי אפיתל פיגמנט עיני מעין ארנב

תאי אפיתל פיגמנט הם תאים קובואידיים מובחנים סופיים המחוברים בצמתים הדוקים. תאי אפיתל אלה המרפדים את הקשתית הם תאי האפיתל של פיגמנט הקשתית או תאי IPE, ואלה הסמוכים לרשתית הם תאי האפיתל של פיגמנט הרשתית או תאי RPE.

כדי לחלץ את התאים הללו, קח עין ארנב שלמה. טפלו בעין בחומר חיטוי כדי להסיר מיקרואורגניזמים מפני השטח של העין. שוטפים את חומר החיטוי בתמיסת חיץ. בצע חתך ליד הקשתית. באמצעות פתח זה, בצע חתך מעגלי שלם לאורך גבול הקשתית, וחלק את העין למקטע קדמי המכיל קשתית וחלק אחורי המורכב מהרשתית והומור הזגוגית.

קח את הקטע הקדמי והשליך את העדשה כדי לגשת לקשתית. מוציאים את הקשתית ומניחים אותה על צלחת תרבות. לאחר מכן, קח את הקטע האחורי והשליך את הזגוגית הג'לטינית ואת הרשתית מהפקעת.

טפל בקשתית ובנורת העין עם טריפסין ודגירה. טריפסין משפיל את הצומת ההדוק ואת חלבוני המטריצה החוץ-תאיים, ויוזם דיסוציאציה של תאי אפיתל. זורקים את הטריפסין ומוסיפים מדיום תרבית מתאים. מגרדים בעדינות את הקשתית ואת משטח הנורה כדי לשחרר את תאי האפיתל במדיום.

לבסוף, זרעו את תאי ה-IPE וה-RPE בבארות נפרדות. התאים מוכנים לבדיקות נוספות במורד הזרם.

לאחר המתת חסד של החיה, השתמש במספריים מעוקלים ובמלקחיים של Colibri כדי להוציא את העיניים, ולאחר מכן נקה את רקמת השריר והעור שנותרו מהעיניים. אסוף את העיניים בצינור של 50 מיליליטר מלא