JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 2:57 דק' • July 8th, 2025
העין החזירית מכילה אוכלוסייה של תאי אפיתל קובואידיים המכילים מלנוזומים רבים - אברונים המסייעים בספיגת אור - וכתוצאה מכך המראה הפיגמנטי של תאים אלה. בהתאם למיקום התאים הללו, תאי אפיתל הנמצאים מתחת לרשתית נקראים תאי אפיתל פיגמנט רשתית, או תאי RPE, ואלה המצפים את הקשתית ידועים כתאי אפיתל פיגמנט קשתית, או תאי IPE.
כדי לבודד תאי RPE ו-IPE, התחל בלקיחת עין חזירית. טבלו את העין בתמיסת חיטוי מתאימה כדי להסיר את כל החיידקים שנדבקו לפני השטח של העין.
הסר את העין מתמיסת החיטוי והשתמש במחט כדי לבצע חתך קטן ליד הקשתית. השתמש בפתח זה כדי לבצע חתך היקפי שלם לאורך גבול הקשתית. זה מנתק את החלק הקדמי של העין המכיל את הקשתית מהפקעת האחורית, שיש בה את הרשתית. הסר את החלק העודף והעביר את הקשתית ואת הנורה לכלי תרבות נפרדים.
הוסף מצע תרבית מתאים לצלחת המכילה קשתית העין, ובתוך נורת העין. מגרדים את הרקמה. הכוח המכני משחרר את תאי האפיתל, ומשחרר אותם למדיה. שאפו את תאי ה-IPE וה-RPE המנותקים. זרעו אותם לצלחות תרבית נפרדות ודגרו עד לשימוש נוסף.
יש לנקות את רקמת השריר והעור שנותרו מהעיניים, ולחטא את העיניים בתמיסה על בסיס יוד, ולשטוף אותן עם PBS.
כדי לבודד תאי IPE, הסר את העדשה ומשוך החוצה את הקשתית, כפי שהודגם. לאחר הכנת שתי קשתית יש להוסיף 1 מיליליטר של מדיום שלם ולבודד את התאים על ידי גירוד עם פיפטת פסטר שטוחה מלוטשת באש, ואז לספור ולזרוע את התאים. מניחים את הצלחת בחממה.
כדי לבודד תאי RPE, הסר את הזגוגית והרשתית מהמקטע האחורי, והנח את הנורה בצלחת פטרי. מלאו את הנורה במדיום שלם של 1 מיליליטר. בעזרת פיפטת פסטר מעוקלת מלוטשת אש, הסר את תאי ה-RPE, אסוף את תרחיף התאים בתוך הנורה באמצעות פיפטה של 1,000 מיקרוליטר, והעביר אותו לצינור של 1.5 מיליליטר לתלייה מחדש. לאחר מכן, ספרו וזרעו את התאים, ודגרו על הצלחת כפי שהודגם קודם לכן.