מערכת מיקרוביוריאקטור שיש נוזלי: פרוטוקול תרבית תלת ממדי לאנקפסולציה של ביציות חזיריות

הכינו מצע של אבקת אתילן פרופילן פלואור, או FEP, בכלי תרבית. הוסיפו טיפה של מדיום התבגרות המכיל קומפלקסים של קומולוס-ביציות, או COCs, על אבקת ה-FEP. מגלגלים בעדינות את הטיפה על האבקה ליצירת גולה נוזלית, או LM. אבקת ה-FEP יוצרת מעטפת נקבובית הידרופובית, המאפשרת חילופי גזים בין הנוזל הפנימי לסביבה הסובבת.

כעת, אספו את יחידת ה-LM והעבירו אותה לבאר המרכזית של צלחת פטרי IVF. הוסף מים סטריליים לטבעת החיצונית כדי לשמור על לחות ה-COCs. לאחר מכן, דגרו את ה-LM בתנאים פיזיולוגיים כדי לאפשר הבשלת ביציות.

לאחר מכן, הסר את המדיום המושקע והוסף מדיום התבגרות טרי. מגע ישיר עם נוזל משבש את מעטפת ה-FEP ההידרופובית ושובר את ה-LM כדי לשחרר את ה-COCs. העבירו את ה-COCs המשוחררים לכלי חדש המכיל טיפה טרייה של מדיום התבגרות ושטפו אותם כדי להסיר חלקיקי FEP.

לאחר הכביסה, העבירו את ה-COCs ואת המדיום הטרי למצע אבקת FEP. מגלגלים את הטיפה כדי לצפות אותה באבקה. לבסוף, העבירו את ה-LM לצלחת פטרי IVF. LMs מצופים אבקת FEP שומרים על המבנה התלת-ממדי של הביציות ומשפרים את הכדאיות שלהם.

הכינו מצע של 5 גרם אבקת FEP בצלחת פטרי בגודל 30 מילימטר. מחלקים טיפה אחת של מדיום התבגרות, המכיל 3 עד 5 COCs על אבקת FEP. סובב את הצלחת בעדינות בתנועה סיבובית כדי להבטיח שהחלקיקים מכסים לחלוטין את פני טיפת הנוזל ויוצרים גולות נוזליות או LMs.

הכינו מספר צלחות פטרי IVF בגודל 60 מילימטר והוסיפו 3 עד 4 מיליליטר מים סטריליים לטבעות החיצוניות ליצירת תא לחות. הרם את ה- LM שנוצר עם פיפטה של 1,000 מיקרוליטר והנח אותו בבאר המרכזית. דגרו על הגולות במשך ארבעה ימים בטמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס באינקובטור של 5% פחמן דו חמצני.

כדי לשנות את המדיום, יש למרוח 30 מיקרוליטר של מדיום התבגרות על כל LM, מה שיגרום לו להתפשט. כאשר תכולת השיש מתמוססת, העבירו את ה-COCs המשתחררים מהביו-ריאקטור לטיפה של מדיום התבגרות טרי בצלחת הפטרי. לאחר 3 עד 4 כביסות במדיום התבגרות, העבירו את ה-COCs יחד עם 30 מיקרוליטר של מדיום טרי, על מצע אבקת FEP.

סובב בעדינות את הצלחת בתנועה סיבובית כדי להבטיח שחלקיקי האבקה מכסים לחלוטין את פני טיפת הנוזל ויוצרים LM חדש. לאחר מכן, העבירו את ה-LM לצלחת פטרי IVF.