בידוד תאי אנדותל של אבי העורקים החזירי (pAEC): שיטה מבוססת אנזימים לבידוד תאי אנדותל מאבי העורקים הבטני של חזירים שנקטפו
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 4:50 דק׳ • July 8th, 2025
אבי העורקים - העורק הראשי המוביל דם מחומצן מהלב לגוף - מורכב משלוש שכבות או 'טוניקות': אינטימה פנימית, מדיה אמצעית ואדוונטיציה חיצונית. תאי אנדותל או ECs נמצאים באינטימה כשכבה חד-שכבתית דקה ורציפה מעל קרום בסיס תומך המורכב מחלבונים מבניים, בעיקר קולגן.
כדי לבודד ECs, התחל עם אבי העורקים החזירי שנקטף בצלחת תרבית. כרתו את קצותיו ואת כל הרקמות הדבקות שמסביב כדי למנוע זיהום של תאים שאינם אנדותל. שטפו את אבי העורקים עם בופר המכיל אנטיביוטיקה כדי לעכב צמיחת חיידקים.
העבירו תפר כירורגי סטרילי דרך אבי העורקים וקשרו את אחד מקצותיו, תוך שמירה על התפר בתוך הלומן. אבטח את הקצה הקשור ומשוך את התפר כדי להפוך את אבי העורקים לחלוטין. זה חושף את האינטימה המכילה EC לעיכול אנזימטי. טפלו באבי העורקים בתמיסת קולגנאז מחוממת מראש בריכוז נמוך לפעילות אנזימים אופטימלית ודגירה.
קולגנאז מפרק את חלבוני הקולגן הקיימים בקרום הבסיס העומד בבסיס ה-ECs, ויוזם את הדיסוציאציה שלהם. לאחר הדגירה, יש להוסיף חוצץ מקורר כדי לנטרל את אנזימי הקולגנאז.
מגרדים בעדינות את המשטח האינטימי של אבי העורקים ושוטפים אותו עם חיץ כדי לשחרר את ה-ECs לתמיסה. צנטריפוגה את הפתרון הזה כדי לגלול את ה-ECs. השעו מחדש את הגלולה במדיום מתאים. זרע את תרחיף התאים בבקבוק תרבית ודגירה. ה-ECs נצמדים לתחתית הבקבוק ומתרבים.
לבידוד תאי אנדותל אבי העורקי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים