הפשרת עוברי ארנב: הליך התחממות לשחזור עוברי ארנב שמורים בהקפאה לצורך החזרת עוברים

הפשרת עוברים היא תהליך שבו עוברים קפואים משומרים בהקפאה מחוממים ומתייבשים, ומחזירים את פעילותם הביולוגית.

כדי להפשיר עוברי ארנב משומרים בהקפאה בקש קריוגני אטום, הסר את הקש מחנקן נוזלי. העוברים, עם נפח מינימלי של חומר המכיל קריופרוטקטנט, מבודדים פיזית על ידי מקטעי אוויר ומדיה בתוך הקש. מקם בקצרה את הקש באוויר, מה שמקל על שחרור אדי חנקן נוזלי כלואים, שאחרת גורמים נזק לעובר במהלך חשיפה לטמפרטורות חמות יותר.

העלייה המהירה מטמפרטורות חנקן נוזלי קריוגני לטמפרטורות הקפאה גבוהות יותר יוזמת היווצרות גבישי קרח בתוך הקש הקריוגני, ומסתכנת בנזק לעובר. כאשר גבישי קרח מתחילים להיווצר, טבלו מיד את הקש באמבט מים מבוקר טמפרטורה עם תסיסה עדינה להפשרה אחידה. שלב זה מסיר את גבישי הקרח, ומגן על העוברים מפני נזק לגבישי קרח.

הסר את תקע הקש. חותכים את הקצה האטום של הקש; חבר מיקרו-מתקן כדי לשחרר את התוכן לצלחת תרבית עם מדיה המכילה סוכרוז. המדיה מסייעת בהסרת חומרי הקפאה מהעוברים; הסוכרוז מונע נפיחות מוגזמת של העוברים, ומחזיר את הסביבה הפיזיולוגית שלהם במהלך החזרת הנוזלים.

העבירו את העוברים לצלחת טרייה המכילה מדיה כדי להסיר לחלוטין חומרים קריופרוטקטים, מה שמבטיח החזרת נוזלים מלאה. העוברים המופשרים מוכנים להליכי העברת עוברים.

כדי להפשיר את העוברים להעברה, הניחו את המיני-קש בצורה אופקית, 10 סנטימטרים מאדי החנקן הנוזלי למשך 20 עד 30 שניות. כאשר תהליך ההתגבשות מתחיל בתוך המיני-קש, טבלו את הקש באמבט מים של 25 מעלות צלזיוס למשך 10 עד 15 שניות. הסר מיד את פקקי הקש והכותנה, והשתמש במיקרו-דיספנסר מצומד כדי להוציא את תכולת המיני-קש לצלחת המכילה מדיום בסיס של 25 מעלות צלזיוס בתוספת תמיסת סוכרוז טוחנת של 0.33 בה העוברים חייבים להישאר במשך 5 דקות. לאחר מכן, העבירו את העוברים לצלחת של מדיום בסיס טרי לדגירה נוספת של 5 דקות.