מיקרו-הזרקה של עובר יתוש: טכניקה להעברת DNA אקסוגני לחלמון עובר של אנופלס גמביה ליצירת מוטציות בקו הנבט
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:12 דק׳ • July 8th, 2025
כדי להזריק מיקרו DNA אקסוגני לעובר אנופלס, קח את המספר הרצוי של ביצי יתושים טריות, טרום-בלסטודרם. בשלב התפתחותי מוקדם זה, הביצית מכילה גרעינים מבלי ליצור מבנים תאיים.
הניחו את הביצים בצורת סירה בשולי נייר סופג לח הקיים על פני מגלשת זכוכית. שלב זה מבטיח הידרציה נאותה של העובר כדי להקל על ההזרקה בשלבים הבאים. יישר את הביצים הסמוכות זו לזו כשפני הגחון שלהן חשופים כלפי חוץ.
כעת, קח מחט מיקרו-הזרקה צרה המכילה את תמיסת הפלסמיד הרצויה. השתמש במיקרוסקופ מנתח כדי למקם את המחט ליד הקוטב האחורי של הביצית - אתר למבשרי תאי הנבט. הכנס את המחט בזווית מתאימה שהיא חודרת את האקסוכוריון - השכבה החיצונית - ואת האנדוכוריון - שכבה פנימית של קליפת הביצה - ובסופו של דבר מגיעה לעובר.
הזרקו את תערובת הפלסמיד לחלמון העובר. משוך בעדינות את המחט ואפשר לביצים לצמוח בתנאים מתאימים. ככל שהביצית גדלה, חלק מהגרעינים נודדים לקוטב האחורי, שם הם יכולים לשלב את המיקרו-דנ"א המוזרק. גרעינים אלה הופכים מאוחר יותר לגמטות - תאי המין שיכולים לגרום למוטציות תורשתיות בקו הנבט.
דמיין את היתושים הבוגרים לפנוטיפ שעבר טרנספורמציה - המאפיינים הנצפים בדורות הבאים המאשרים מיקרו-הזרקה מוצלחת.
השתמש בקצה מיקרו-מעמיס כדי למלא את המחטים בשני מיקרוליטר של תערובת DNA. הכנס את המחט למחזיק המחט וחבר את צינור משאבת הלחץ האוטומטי. יישר את המחט
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים