אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:08 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לבצע מיקרו-הזרקה רובוטית של תאים, התחל בהעמסת תמיסת פוליסכריד מקוררת עם תווית פלואורסצנטית לתוך מחט מיקרו-הזרקה אופטימלית. התקן את המחט הטעונה על המחזיק של מיקרומניפולטור הניתן לתכנות למיקום מדויק של המחט במהלך הזרקת מיקרו.
העבירו צלחת תרבית המכילה פרוסות רקמת מוח אורגנוטיפית עוברית של עכבר במדיה על במת מיקרוסקופ מחוממת כדי לשמור על תנאים פיזיולוגיים של רקמות. התמקדו במשטח הבסיסי של פרוסת רקמת המוח, הכוללת נוירונים פירמידליים, וטבלו את המחט במדיה כדי למקם אותה קרוב לתאי העצב שיש להזריק מיקרו.
התאם את לחץ הפיצוי כדי למנוע זרימה חוזרת של מדיה לתוך המחט באמצעות פעולה נימית.
באמצעות תוכנה, הגדר את המסלול וזווית המחט. מקם את המחט בנקודת ההתחלה של המסלול הממופה והתחל את ריצת המיקרו-הזרקה האוטומטית.
המחט עוברת מרחק מוגדר לעבר תא המטרה. הכוח המופעל גורם למחט ללחוץ על קרום התא, הבונה מתח מקומי, ולקרוע את שכבת הפוספוליפידים הדו-שכבתית, ומאפשר חדירה. עם הגישה לתא הציטופלזמי, המחט - לפי לחץ ההזרקה שנקבע - מוציאה נפח מבוקר של התמיסה הטעונה. לאחר ההזרקה, המחט נסוגה.
הנקב בקרום התא מעורר תגובת תיקון תאית פנימית לשחזור הומאוסטזיס הממברנה. קרום התא נאטם מחדש עם נזק מינימלי לנוירונים, ולוכד את תמיסת הפוליסכריד המסומנת פלואורסצנטית. ריצת המיקרו-הזרקה נמשכת עד שכל התאים במסלול מוזרקים. נוירונים שה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים