טרנספורמציה גנטית בתיווך אגרובקטריום: שיטה לשינוי גנטי של גנום האורז באמצעות גידולי אגרובקטריום מהונדסים גנטית

ניתן להנדס גנטית Agrobacterium tumefaciens, חיידק פתוגני צמחי, על ידי החדרת פלסמיד Ti שהוכן באופן מלאכותי, הנושא גן מעניין בהעברת ה-DNA או אזור ה-T-DNA שלו, ופלסמיד עוזר הנושא את הגנים האלימים או ה-Vir להעברת ה-T-DNA לתאי הצמח.

לטרנספורמציה גנטית בתיווך אגרובקטריום, התחל עם תפרחת אורז צעירה וחתוך אותה לחתיכות קטנות. מעבירים את הייחורים למצע גידול ודוגרים כדי להקל על גידול הייחורים למסת תאים לא ממויינת הנקראת יבלת.

כעת, העבירו את היבלת למדיום חדירה של אגרובקטריום המכיל אצטוסירינגון - חומר כימואטרקטיבי לאגרובקטריום. לאחר מכן, הוסף תרבית של אגרובקטריום מהונדס גנטית למדיום ודגירה קצרה.

מולקולות האצטוסירינגון מפעילות את חלבון קולטן התא - VirA - על קרום האגרובקטריום, המתווך עוד יותר את הזרחן של חלבון מפעיל שעתוק - VirG. VirG זרחני נע לעבר הפלסמיד המסייע ומפעיל את השעתוק של מפל של גנים אלימים, כולל חלבוני תעלה ואנדונוקלאזות - VirD1 ו-VirD2.

חלבוני התעלה יוצרים תעלת הובלה המחברת בין תא החיידק לתא הצמח, ואילו האנדונוקלאזות נקשרות לרצפי הגבול בפלסמיד Ti ומבקעות את ה-T-DNA עם VirD2, הקשור בקצה אחד. לאחר מכן, VirD2 מכוון את כניסת T-DNA דרך תעלת ההובלה לתאי היבלות ומקל על שילובו בגנום האורז.

נגב כל תפרחת בעזרת ספוגית אלכוהול של 70%, ותן לה להתייבש לפני החיתוך. הביאו את התפרחת לספסל מעבדה סטרילי