אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:59 דק׳ • July 8th, 2025
להעברת DNA פלסמיד מבוססת אלקטרופורציה לתאי עצב ראשוניים, התחל בהשעיה של תאים באמצעי אלקטרופורציה מתאימים. הוסף DNA פלסמיד מקודד חלבון פלואורסצנטי להכנת תערובת האלקטרופורציה.
העבירו בעדינות את תערובת האלקטרופורציה לקוביית אלקטרופורציה, הימנעו מבועות אוויר שעלולות להשפיע לרעה על יעילות האלקטרופורציה. העבר את הקובט למחזיק הקובט של האלקטרופורטור; הגדר את פרמטרי האלקטרופורציה. התחל אלקטרופורציה.
הפולסים החשמליים הקצרים במתח גבוה המופעלים על פני קרום התא גורמים להצטברות מטען דיפרנציאלי משני צידי הממברנה, מה שמגדיל את הפוטנציאל הטרנסממברני, המתח על פני קרום התא.
כאשר פוטנציאל הטרנסממברנה המושרה עולה על פוטנציאל פירוק שכבת השומנים הדו-שכבתית, שכבת השומנים הדו-שכבתית מתערערת עם שינוי התצורה המקומי, ויוצרת נקבוביות הידרופיליות חולפות על קרום התא. הנקבוביות בגודל מתאים מספקות מסלול ל-DNA פלסמיד להיכנס לציטופלזמה של התא.
עם השלמת האלקטרופורציה, שכבת השומנים הדו-שכבתית אוטמת מחדש, משחזרת את שלמות קרום התא הדו-שכבתי, ובכך לוכדת את ה-DNA של הפלסמיד. יתר על כן, בשלב מחזור התא כאשר הממברנה הגרעינית, הממברנה הדו-שכבתית המקיפה את הגרעין, מתפרקת, DNA פלסמיד עובר לגרעין.
צלחת תאים אלקטרופורטיים לבארות המכילות מדיה של צלחת מרובת בארות עם כיסויים מצופים חלבון. דגירה כדי לאפשר לתאים להיצמד לכיסוי המצופה ח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים