נוקלאופקציה של צורות טפילים: שיטת טרנספקציה מבוססת אלקטרופורציה להעברת חלבון פלואורסצנטי המקודד פלסמידים לגרעין ספורוזואיט

כדי להעביר פלסמידים לגרעיני ספורוזואיט על ידי נוקלאופקציה, התחל בהשעיה של ספורוזואיטים מבודדים וברי-קיימא - שלב תנועתי וזיהומי של טפילים - במאגר. ספורוזואיטים הם תאים בעלי צורה דקה המוקפים בקרום פלזמה חיצוני וקומפלקס ממברנה פנימית בסיסית המורכב מסדרה של שלפוחיות שטוחות וחלבונים החיוניים ליציבות מבנית ותנועתיות.

צנטריפוגה את התרחיף כדי לגלול את הספורוזואיטים. השעו מחדש את גלולת הספורוזואיט בנפח מתאים של מאגר טרנספקציה גרעינית, בתוספת פלסמידים מקודדי חלבון פלואורסצנטי. מאגר טרנספקציה גרעינית עם יכולת חציצה גבוהה וחוזק יוני מבטיח טרנספקציה יעילה תוך שמירה על פונקציונליות ספורוזואיט.

העבר את המתלה לקובט טרנספקציה גרעינית. הנח את הקובט לתוך המחזיק של מכשיר נוקלאופקציה. הפעל את תוכנית הגרעין המתאימה.

במהלך נוקלאופקציה, המיושמים באופן ספציפי, פולסים קצרים במתח גבוה, יחד עם מרכיבי חיץ, משבשים באופן זמני את קרום הפלזמה ואת קומפלקס הממברנה הפנימית, ויוצרים נקבוביות טרנסממברניות, המספקות גישה לפלסמידים לציטופלזמה.

במקביל, שדות חשמליים בעלי חוזק גבוה אלה מפריעים גם לממברנה הגרעינית הדו-שכבתית המקיפה את הגרעין המפתח פערים חולפים, מה שמקל על כניסה ישירה של פלסמידים לגרעין, ללא צורך בחלוקת תאים.

לאחר השלמת הגרעין נקבוביות, נקבוביות הממברנה התאית והגרעינית נאטמות מחדש, ומחזירות את שלמות הממברנה וה