הזרקת פריביטלין מבוססת וקטור לנטיויראלי: שיטה להמרת הגן המעניין לביציות עכבר חד-תאיות מופרות

כדי לבצע טרנספקציה, קח תא מיוחד המכיל ביצי עכברים מופרות טריות תלויות בטיפת מדיה מתאימה. בשלב זה, הביצית מכילה ביצית מרכזית גדולה המכילה הן את הפרו-גרעינים האבהיים והן את האם.

הביצית מכוסה ב-zona pellucida עשיר בגליקופרוטאין, מוקף באשכולות מסודרים היטב של תאי קומולוס המשובצים בתוך המטריצה החוץ-תאית העשירה בחומצה היאלורונית. כעת, טפלו בביצים עם האנזים היאלורונידאז, המעכל את החומצה ההיאלורונית. זה מנתק את תאי הקומולוס, ובסופו של דבר חושף את ה-zona pellucida המקיף את הביצית.

מקם ביצית מטופלת בודדת ליד קצה פיפטה אחיזה והפעל לחץ יניקה כדי לרסן את מיקומה. קח מחט מיקרו-הזרקה צרה המכילה תרחיף וקטור לנטי-ויראלי מהונדס הנושא טרנסגן עטוף בתוך המעטפת הנגיפית. לרטרו-וירוסים אלה יש את היכולת הטבועה להשתלב בגנום המארח.

לאחר מכן, חודרים את המחט דרך ה-zona pellucida כדי להגיע לחלל ה-perivitelline - רווח בין ה-zona pellucida החיצוני ביותר לקרום הפלזמה הפנימי ביותר. הכניסו את תרחיף הווקטור הלנטי-ויראלי לחלל הפריוויטלין ודגרו כדי להקל על התמרה - תהליך של העברה גנטית בתיווך וירוסים.

הווקטור הנגיפי מתמזג עם קרום הביציות, ומאפשר שחרור של ה-RNA הטרנסגני לתוך הציטופלזמה של הביציות, אשר מתעתקים לאחור ל-DNA דו-גדילי. בסופו של דבר, ה-DNA משתלב במיקומים ספציפיים בגנום המארח, וכתוצאה מכך ביטוי הטרנסגנים.

בהכנה,