אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:31 דק׳ • July 8th, 2025
העברת גנים לנטי-ויראלית בסיוע לייזר היא טכניקה להעברת טרנסגן למערכת מארח.
כדי לייצר עכברים טרנסגניים, התחל עם ביצים מופרות עכברים מבודדות במדיום תרבית מתאים. מניחים את צלחת התרבית המכילה ביצית מופרית על במת מיקרוסקופ המותקנת מראש עם מכשיר לייזר ומחוברת לתוכנת בקרה. התבונן בהגדלה מתאימה.
ביציות מופרות מוקפות ב-zona pellucida, שכבת גליקופרוטאין מגנה החוסמת חלקיקים לנטי-ויראליים. כדי לחדור את המחסום הזה, הפעל את מכשיר הלייזר וודא שנורית הלייזר נראית מעל ה-zona pellucida. באמצעות תוכנת הבקרה, ירו את הלייזר. התאם את משך הירי בהתאם לקוטר הניקוב הרצוי.
מניחים את הביצים בחממה להתאוששות. לאחר דגירה קצרה, הסר את הביצים והוסף חלקיקי לנטי-וירוס הנושאים את הגן המעניין וסמן פלואורסצנטי לבחירה.
עם zona pellucida מחורר, נגיף הלנטי מתפזר בקלות לכיוון קרום תא הביצה ונכנס דרך אנדוציטוזיס. ה-lentivirus מתפרק ומשחרר את ה-RNA שלו, שכאשר הוא מעובד ברצף ל-DNA דו-גדילי, נכנס לגרעין המארח, ומשלב את הגנים הזרים בגנום המארח.
דגרו על הביצים ואפשרו להן להתפתח לבלסטוציסטים. השתל את הבלסטוציסטים בעכברים נקבות מזווגות. לאחר השלמת ההריון, שחזרו את הגורים ונתחו אותם לנוכחות טרנסגנית.
בזמן שהביצים נמצאות בחממה, הגדר וכייל את לייזר XYClone בהתאם להמלצות היצרן. כאשר הביצים מוכנות, הנח את צלחת הטיפה הראשונה על שלב מיקרו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים