העברת גנים בתיווך ביולוגי: טכניקה להעברת גן מעניין בתאי מטרה באמצעות אקדח גנים ביוליסטי

התחל עם נפח אופטימלי של חרוזי זהב - כלי העברת גנים אינרטיים ביולוגית ולא רעילים - בצינור מיקרוצנטריפוגה. לאחר מכן, הוסף חומרים קטיוניים - ספרמידין וסידן כלורי, ואחריהם את שברי ה- DNA הרצויים לחרוזי הזהב. העבירו בעדינות את הצינור ודגרו.

סידן כלורי נקשר לשברי ה-DNA ומקל על ציפוים על חרוזי זהב באמצעות שאריות ספרמידין. לאחר מכן, צנטריפוגה והסר את הממס. השעו מחדש את החרוזים המצופים ב-DNA באתנול. פיפטה בעדינות את החרוזים על דיסק מקרו-נשא סטרילי. תן לזה להתייבש.

הקימו מנגנון אקדח גנים ביוליסטי הכולל צינור תאוצה של גז הליום ותא הפצצה עם דיסק קרע ומסך עצירה בחריצים שלהם. לאחר מכן, הפוך את דיסק המקרו וטען אותו מתחת לדיסק הקרע.

לאחר מכן, הנח את תאי מארח המטרה בתרבית במדיום מוצק מתאים בתוספת סורביטול - מייצב אוסמוטי לשיפור יעילות הטרנספורמציה. לאחר שההתקנה מוכנה, ירה באקדח הגנים.

כאשר הליום נע במורד צינור התאוצה, הלחץ ממשיך להצטבר עד שדיסקת הקרע נשברת, ויוצר גלי הלם של הליום. גלי ההלם האלה מניעים את דיסק המקרו-נושא הנושא חרוזי זהב לעבר מסך העצירה, שמאפשר רק לחרוזי הזהב לעבור.

חרוזי הזהב המואצים חודרים לגרעין התא המארח, ומשלבים את ה-DNA הרצוי בגנום התא המארח.

התחל בשימוש במלקחיים כדי לטבול דיסקים ביוליסטיים כתומים ב-100% אתנול, ולאחר מכן, העביר את הדיסקים לצלחת פטרי גדולה המכילה יבש, תוך הקפדה