טרנספקציה במבחנה מבוססת מגנטופקציה: טכניקה בסיוע שדה מגנטי להעברת פלסמידים לתאי עצב ראשוניים של עכבר באמצעות ננו-חלקיקים מגנטיים

0 צפיות • 3:43 דק׳ • July 8th, 2025

התחל עם DNA פלסמיד מקודד חלבון פלואורסצנטי או תרחיף pDNA במדיה. הוסף ננו-חלקיקים מגנטיים מצופים פולימר קטיוני תואמים ביולוגית לתרחיף ה-pDNA והדגירה.

הפולימרים הקטיוניים הטעונים חיובית מקיימים אינטראקציה אלקטרוסטטית ומצומדים עם pDNA טעון שלילי, וכתוצאה מכך עיבוי pDNA ויצירת 'פוליפלקסים מגנטיים' עם מטען חיובי כולל.

כעת, העבירו את תערובת הפוליפלקס לצלחת מרובת בארות המכילה תרבית תאי עצב ראשונית של עכבר. הרכיבו את הצלחת מרובת הבארות על צלחת מגנטית ודגרו.

השדה המגנטי שנוצר על ידי הלוח המגנטי גורם לפוליפלקסים לשקוע ולהצטבר על פני התא העצבי. מגע הדוק זה עם פני התא מקל על קשירה לא ספציפית של פוליפלקסים טעונים חיובית לפרוטאוגליקנים הקשורים לקרום התא טעונים שלילית.

לאחר מכן, הפוליפלקסים מופנמים באמצעות אנדוציטוזיס - תהליך שבו האזורים המקומיים של קרום התא פולשים וצובטים ליצירת שלפוחיות הקשורות לממברנה הנקראות אנדוזומים.

בתוך הציטופלזמה, הפולימרים הקטיוניים של הפוליפלקס גורמים להצטברות פרוטונים באנדוזום. הזרם בו זמנית של יוני כלוריד לשמירה על ניטרליות המטען מגביר את החוזק היוני האנדוזומי, מה שמוביל לזרם מים.

בסופו של דבר, האנדוזומים מתנפחים ונקרעים עקב לחץ אוסמוטי, ומשחררים פוליפלקסים לציטופלזמה. ה-pDNA המעובה בתוך הפוליפלקסים מקל על תנועתיות ציטוזולית מוגברת, בעוד שהפולימרים הקטיוניים מגנים על

צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים

התחברות

גלה סרטונים נוספים

DNA פלסמידי