אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:02 דק׳ • July 8th, 2025
כדי להמיר תאים מארחים עם RNA המכיל וקטורים רטרו-ויראליים, קח שפופרת המכילה וקטורים ארוזים במדיה מתאימה. כל וקטור מכיל קפסיד נגיפי, המכיל את משלים ה-RNA של הטרנסגן שישולב בגנום המארח ובאנזימים נגיפיים חשובים. שכבת שומנים דו-שכבתית מקיפה את הקפסיד כדי להקל על הכניסה לתא המארח.
הוסף את הווקטורים בנוכחות מגיב טרנספקציה מתאים לבאר של לוחית תרבית המכילה את תרחיף התא המארח. מכסים את הצלחת. צנטריפוגה במהירות נמוכה כדי לאפשר העברת ספין. זה מקרב את הווקטור הנגיפי לפני השטח של התא המארח, ומגביר את יעילות ההתמרה.
במקביל, הפוליקציות במגיב הטרנספקציה מנטרלות מטענים שליליים על הנגיף ועל התא המארח, ומקדמות ספיחה ויראלית לתאי מטרה.
כתוצאה מכך, קולטנים על פני הנגיף מקלים על היתוך שלו עם קרום המארח. הקפסיד הנגיפי נכנס לתא ונקרע, ומשחרר RNA טרנסגני ואנזימים נגיפיים לציטופלזמה שלו.
בתוך הציטופלזמה, הטרנסקריפטאז ההפוך הנגיפי ממיר את ה-RNA ל-DNA משלים חד-גדילי, ומאוחר יותר הופך אותו ל-DNA פרו-ויראלי דו-גדילי. ה-DNA שנוצר נכנס לגרעין. אנזים אינטגראז ויראלי מתווך את השילוב של DNA פרו-ויראלי בגנום המארח, וכתוצאה מכך תאים מתמרים.
אסוף סופרנטנט ויראלי טרי מקו התאים של היצרן הנגיפי. בשלב זה, התאים צריכים להיות מרווחים היטב עם מורפולוגיה מוגדרת. לאחר מכן, שאפו בזהירות את 2 מיליליטר המדיום העליונים מכל באר של צל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים