אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 2:44 דק׳ • July 8th, 2025
סטיאטוזיס בכבד הוא מצב פתולוגי המאופיין בהצטברות מוגזמת של שומנים בהפטוציטים - סוג תאי כבד בולט. השומנים משקעים בצורה של טיפות שומן בגדלים שונים בציטופלזמה של הפטוציטים.
מבחינה מבנית, טיפת שומנים מכילה ליבה של שומנים ניטרליים והידרופוביים כגון טריגליצרידים ואסטרי כולסטרול. הליבה מוקפת בשכבה חד-שכבתית פוספוליפידית מעוטרת בחלבונים שונים.
כדי לדמיין שקיעת שומן, קח צלחת מרובת בארות המכילה תרבית הפטוציטים דביקה. התאים מטופלים מראש במדיום סטאטוגני כדי לגרום להצטברות טיפות שומנים בתוכם.
הוסף את הריכוז הרצוי של פרפורמלדהיד, המתפזר לתאים, ומקשר בין החלבונים. שלב זה מנטרל פרוטאזות ושומר על מבנה הפטוציטים. השליכו את הפרפורמלדהיד והוסיפו את תמיסת Oil-red-O המכילה את הצבע האורגני המומס באיזופרופנול.
האיזופרופנול פועל כממס נשא עבור מולקולות Oil-red-O המסיסות במשורה. זה עוזר למולקולות הצבע להיכנס להפטוציטים קבועים ובסופו של דבר להגיע לטיפות השומנים. ברגע שנכנס פנימה, הצבע עובר מהאיזופרופנול לשומנים ניטרליים בשל הזיקה הגבוהה יותר שלו, ויוצר את קומפלקס הצבע-שומנים. התוצאה היא צבע אדום של טיפות שומנים.
השליכו את עודפי הצבע והתבוננו בתאים במיקרוסקופ. טיפות השומנים התוך-תאיות נראות אדומות מאוד.
שים כיסוי תרבית תאים בכל באר בצלחת של 24 בארות, וזרע תאי HepG2, כמתואר בכתב היד הטקסטואלי. לאחר הדגירה המתאי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים