צביעה אדומה של הנילוס: טכניקה לזיהוי וכימות שומנים ניטרליים תוך-תאיים באצות

אצות הן אורגניזמים פוטוסינתטיים מימיים המייצרים מגוון שומנים, מתוכם שומנים ניטרליים חיוניים לייצור ביו-דיזל.

כדי לזהות ולכמת שומנים ניטרליים, מערבבים נפח אופטימלי של תרחיף אצות ואתנול בצלחת מיקרוטיטר שחורה היטב. דופן תא האצה והממברנה, המונעים מרוב הכתמים לחדור, הופכים חדירים כאשר הם נחשפים לאתנול. לאחר מכן, שלב את האתנול עם צבע פלואורסצנטי מסיס בשומנים - אדום נילוס. הוסיפו את התערובת הזו לבאר המכילה אצות.

הנח את לוחית המיקרוטיטר בספקטרופוטומטר. הגדר תוכנית המבטיחה דגירה עם ניעור לסירוגין כדי להקל על האינטראקציה בין הצבע לאצות.

מכיוון שאדום הנילוס הוא הידרופובי, הוא לא יכול לחצות בקלות את הציטופלזמה. ממיסים כמו אתנול, בשילוב עם אדום הנילוס, מגייסים את הצבע ועוזרים לו להגיע לגופי השומנים המפוזרים בציטופלזמה. לאחר מכן אדום הנילוס חודר לגופי השומנים ומסיס שם, ובכך מכתים את השומנים.

תאים חסרי שומנים מופיעים כטבעות פלואורסצנטיות עם גופים כהים, בעוד שתאים עשירים בשומנים מראים זוהר כתום-אדום בוהק במקום שבו גופי השומנים מצטברים.

לאחר צביעת התאים, חשוף אותם לאורך גל שמעורר באופן מקסימלי את השומנים הנייטרליים. רשום את הקרינה המתקבלת ותאם אותה מול עקומת כיול כדי לכמת את השומנים הנייטרליים בדגימות הבדיקה.

לצורך כימות פלואורומטרי, הכינו את כל דגימות האצות באותו ריכוז ביומסה, ובאותו אופן, כמו התק