Von Kossa Staining of Aortic Vascular Smooth Muscle Cells: טכניקת In Vitro להערכת הסתיידות שכבת העורקים האמצעית
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:10 דק׳ • July 8th, 2025
תאי שריר חלק בכלי הדם, או VSMCs, הם המרכיבים התאיים הבולטים בתקשורת הטוניקה - השכבה האמצעית של דופן כלי הדם. בתגובה לרמזים פתולוגיים או להזדקנות, תאים אלה מתווכים הסתיידות כלי דם - תופעה של הצטברות סידן במטריקס החוץ-תאי.
קח צלחת מרובת בארות המכילה שכבה דביקה של תרבית VSMC אבי העורקים העכברי שהסתייד מראש. דגרו על התאים בתמיסת פורמלין כדי להצליב חלבונים תאיים, ולייצב את מבנה ה-VSMC לפני הצביעה.
התחל את צביעת פון קוסה על ידי שאיבת פורמלין מהבאר, והוספת תמיסת כסף חנקתי. דגרו את הצלחת מתחת למקור אור מתאים.
ברגע שתמיסת חנקת הכסף מגיעה לאתרי ההסתיידות במטריצה החוץ-תאית של שכבת ה- VSMC, יוני הכסף מחליפים את יוני הסידן הקשורים לפוספט. התוצאה היא צבע צהוב חולף. בנוכחות חומר אורגני ואור, הפירוק הפוטוכימי של פוספט כסף מביא להיווצרות כסף מתכתי בצבע שחור.
השלך את הכמות המקסימלית של תמיסת כסף חנקתי שהוצאה. טפל בתאים בתמיסת נתרן תיוסולפט. פתרון זה ממיר שאריות מלחי כסף לקומפלקס מסיס במים, אותו ניתן להסיר באמצעות שטיפה אחרונה במים, ולשפר את ניגודיות הכתמים.
דמיין את התאים המוכתמים כדי לאתר את המשקעים השחורים הבלתי מסיסים המעידים על הסתיידות.
כדי לגרום להסתיידות בתאי שריר חלק בכלי הדם, העבירו את התאים לצלחת התרבות בעלת שש הבארות, ואפשרו להם להיצמד. לאחר מכן, הזינו מחדש את התאים באמצעי הסתיידות. דגרו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים