אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:50 דק׳ • July 8th, 2025
לצביעה שלילית של נגיפים עטופים, התחל עם התרחיף הנגיפי הרצוי. דגרו על הנגיפים עם גלוטרלדהיד, מקבע כימי. עם החדירה, גלוטראלדהיד מקשר בין החלבונים הנגיפיים וחומצות הגרעין, מנטרל וירוסים תוך שמירה על המורפולוגיה, ובכך מקל על טיפול בטוח בנגיף. מעבירים את התערובת הזו לצלחת מרובת בארות.
חבר מיקרוסקופ אלקטרונים שידור, TEM, רשתות המכילות קפסולה לפיפטה באמצעות מצמד. בעזרת הפיפטה, שאבו את תערובת קיבוע הנגיף לתוך הקפסולה. דגרו את מכלול הפיפטות כדי שנגיפים יספגו על משטחי הרשת.
הסר את התערובת. שטפו את הקפסולה, הסירו נגיפים ומקבעים שאינם דבקים. פיפטה תמיסה של אורניל אצטט, כתם על בסיס מתכת כבדה, לתוך הקפסולה. דגירה כדי לאפשר לכתם ליצור קשר עם הנגיפים.
יוני אורניל נקשרים לגליקופרוטאינים ספציפיים של הממברנה ולפוספוליפידים על משטחים נגיפיים. יונים יכולים לחדור לנגיפים ולהיקשר לחלבוני הנוקלאוקפסיד הסוגרים את הגנום. קשירה זו גורמת להצטברות ושקיעה של יונים ממתכות כבדות סביב הנגיף ומבנים נגיפיים ספציפיים.
הפרד את הקפסולה. הסר עודפי כתם מהרשתות וייבש באוויר.
במהלך הדמיית TEM, אלומות אלקטרונים בעלות אנרגיה גבוהה חוצות את הנגיף, וגורמות לאזורים המוכתמים בצפיפות האלקטרונים של הנגיף לפזר יותר אלקטרונים. עם זאת, צפיפות האלקטרונים הנמוכה הכוללת של הנגיף מאפשרת לאלקטרונים לעבור. מערכת ההדמיה מעבדת את האלקטרונים
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים