צביעת H&E של קטעי רקמה משובצים פרפין: טכניקת צביעה דיפרנציאלית להדמיית קטעי רקמת כבד באמצעות שילוב של צבעי המטוקסילין ואוזין

0 views • 5:00 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התחל לצבוע המטוקסילין ואאוזין על ידי לקיחת שקופית זכוכית המכילה את קטע הרקמה המוטבע בפרפין. טבלו את השקופית בתמיסת דה-פרפיניזציה המכילה קסילן - ממס אורגני הממיס את שכבת הפרפין סביב הרקמה, מה שהופך אותה לנגישה לכתמים בשלבים הבאים.

טפל בחלק הרקמות באלכוהול מוחלט כדי להסיר את הקסילן. טבלו את הרקמה בריכוזי אלכוהול הולכים ופוחתים. שלב זה מחזיר לחות לרקמה על ידי החלפת האלכוהול במים לתאימות טובה יותר עם צבעים מסיסים במים.

מכתימים את הרקמה בהמטוקסילין בסיסי, אשר בצורתו המחומצנת נקשר למורדנט - קטיון מתכת. קומפלקס זה נקשר אלקטרוסטטית לחומצות הגרעין בגנום, ומכתים את הגרעין בסגול.

טבלו את החלק המוכתם בתמיסת התמיינות חומצית כדי להסיר עודפי המטוקסילין מהציטופלזמה, מה שגורם לגרעין שומר הצבע להיראות מובחן. טפל ברקמה בחומר כחול אלקליין כדי לנטרל את החומצות החופשיות. זה מחזיר את צבע הצבע הסגול לכחול, ומדגיש את הפרטים הגרעיניים.

טבלו את השקופית בתמיסת אאוזין חומצית כדי לצבוע את מרכיבי החלבון הבסיסיים בציטופלזמה ואת סיבי רקמת החיבור בגוונים של אדום עד ורוד. טפל ברקמה באלכוהול כדי לחסל עודף אאוזין. השתמש בריכוזים הולכים וגדלים של אתנול כדי לייבש את הרקמה. טבלו את השקופית בקסילן כדי לנקות את כל הריאגנטים שנותרו.

לאחר ההדמיה, התאים בקטע הרקמה מראים גרעינים כחולים שקופים ואזורים ציטופלזמיים ורודים.

הפחיתו את השקופיות על ידי טבילתן ב-100% קסילן, פעמיים, למשך 15 דקות בכל פעם. לאחר מכן, החזר את המגלשות דרך שיפוע אתנול. עבור כל תמיסה, טובלים 8 עד 10 פעמים, למשך שתי שניות לכל טבילה, עד שהנוזל זורם בצורה נקייה מהמגלשות. הניחו את השקופיות בהמטוקסילין האריס מסונן 100% למשך ארבע דקות.

לאחר ארבע דקות, העבירו אותם במהירות למיכל המים נטולי היונים. העבירו מים נטולי יונים לפינה האחורית של המיכל הרחוק ביותר מהחלקים. רוקן את המיכל מעת לעת עד שהמים כבר לא סגולים.

בדוק במהירות את עוצמת ההמטוקסילין במיקרוסקופ מנתח באמצעות אורות צוואר אווז. החזר את השקופיות ל-100% המטוקסילין למשך דקה אחת, אם נדרש צביעה נוספת.

לאחר שהתקבל צביעת ההמטוקסילין הרצויה, טבלו את השקופיות פעמיים בחומצה הידרוכלורית של 0.05%, ולאחר מכן העבירו אותן מיד בחזרה למיכל עם מים נקיים נטולי יונים. רוקנו ומלאו את המיכל במים פעמיים.

העבירו את השקופיות לשני מיכלים של 95% אתנול למשך 30 שניות כל אחד. יש להניח את השקופיות בתמיסת אאוזין Y פלוקסין-B למשך שתי דקות.

לאחר שתי הדקות, העבירו את השקופיות בחזרה למיכל האתנול הקודם של 95%, ולאחר מכן בדקו את עוצמת הצבע תחת המיקרוסקופ המנתח. אם הצביעה אינה מספיקה, חזור לתמיסת האאוזין למשך 30 שניות. חזור על הפעולה לפי הצורך.

כאשר התקבל מכתים בעוצמה הרצויה, העבירו את השקופיות ל-100% איזופרופנול למשך 15 שניות. החליפו ב-100% איזופרופנול טרי, והניחו את השקופיות בחזרה באיזופרופנול למשך 15 שניות נוספות. חזור על תהליך זה בסך הכל שש שטיפות איזופרופנול.

לאחר טבילה ב-100% קסילן למשך שלוש דקות, הסר שקופית אחת, הוסף אמצעי הרכבה מספיק כדי לכסות את החלקים, ולאחר מכן, טבל את השקופית ב-100% קסילן.

מרחו כיסוי על המגלשה ומחקו את כל אמצעי ההרכבה העודף על מגבת נייר עד שנראה רק קו דק. לאחר מכן, טבלו טישו בקסילן ונגבו את החלק האחורי של השקופית כדי להסיר כל מדיום שטפטף.

הנח את השקופית שטוחה על משטח יציב אך נייד, כמו חתיכת קרטון, ואפשר לקסילן להתאדות במכסה המנוע למשך 10 דקות. השאירו את השקופיות בטמפרטורת החדר למשך הלילה כדי לאפשר למדיום ההרכבה להתקשות לפני ההדמיה.

08:08

qPCR הוא שיטה רגישה ומהירה לאיתור של Cytomegaloviral DNA בקבועה פורמלין, רקמות ביופסיה מוטבעות פרפין

Related Videos

0 Views

09:22

חתך בלוטות החלב שלמות מלא עבור זיהוי הנגע

Related Videos

0 Views

06:36

מכתים אלסטי על פרפין-שקופיות מוטבעות של רקמת סרטן pT3N0M0 קיבה

Related Videos

0 Views

04:17

שימור רקמות משובצות פרפין קבוע פורמלין (FFPE): שיטה לחקר מורפולוגיה של רקמות

Related Videos

0 Views

02:44

שמן אדום O צביעה: טכניקה להכתמת שומנים ניטרליים ב hepatocytes לגילוי סטאטוזיס בכבד במבחנה

Related Videos

0 Views

08:38

סטנדרטי שיטה לניתוח של תאי הכבד סינוסי האנדותל וFenestrations על ידי סריקה מיקרוסקופית אלקטרונים

Related Videos

0 Views

08:58

ניתוח אופטימלי של In vivo ו במבחנה כבדית steatosis

Related Videos

0 Views

10:45

ניתוח היסטולוגית של פגיעה חריפה בכבד אלכוהול דג הזברה

Related Videos

0 Views

11:00

הדמיה, קוונפיקציה, ומיפוי של אוכלוסיות תאים החיסונית במיקרו סביבה הגידול

Related Videos

0 Views

06:45

כתמים היסטולוגיים באמצעות קטעי רקמה צפים חופשיים

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026