אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:00 דק׳ • July 8th, 2025
התחל לצבוע המטוקסילין ואאוזין על ידי לקיחת שקופית זכוכית המכילה את קטע הרקמה המוטבע בפרפין. טבלו את השקופית בתמיסת דה-פרפיניזציה המכילה קסילן - ממס אורגני הממיס את שכבת הפרפין סביב הרקמה, מה שהופך אותה לנגישה לכתמים בשלבים הבאים.
טפל בחלק הרקמות באלכוהול מוחלט כדי להסיר את הקסילן. טבלו את הרקמה בריכוזי אלכוהול הולכים ופוחתים. שלב זה מחזיר לחות לרקמה על ידי החלפת האלכוהול במים לתאימות טובה יותר עם צבעים מסיסים במים.
מכתימים את הרקמה בהמטוקסילין בסיסי, אשר בצורתו המחומצנת נקשר למורדנט - קטיון מתכת. קומפלקס זה נקשר אלקטרוסטטית לחומצות הגרעין בגנום, ומכתים את הגרעין בסגול.
טבלו את החלק המוכתם בתמיסת התמיינות חומצית כדי להסיר עודפי המטוקסילין מהציטופלזמה, מה שגורם לגרעין שומר הצבע להיראות מובחן. טפל ברקמה בחומר כחול אלקליין כדי לנטרל את החומצות החופשיות. זה מחזיר את צבע הצבע הסגול לכחול, ומדגיש את הפרטים הגרעיניים.
טבלו את השקופית בתמיסת אאוזין חומצית כדי לצבוע את מרכיבי החלבון הבסיסיים בציטופלזמה ואת סיבי רקמת החיבור בגוונים של אדום עד ורוד. טפל ברקמה באלכוהול כדי לחסל עודף אאוזין. השתמש בריכוזים הולכים וגדלים של אתנול כדי לייבש את הרקמה. טבלו את השקופית בקסילן כדי לנקות את כל הריאגנטים שנותרו.
לאחר ההדמיה, התאים בקטע הרקמה מראים גרעינים כחולים שקופים ואזורים ציטופלזמיים ורודים.
הפחיתו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים