אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:33 דק׳ • July 8th, 2025
במהלך גרורות סרטניות, תאי גידול מגידול ראשוני עוברים דרך מערכת הדם, יוצאים לאיברים מרוחקים ויוצרים גידולים משניים.
כדי להעריך גרורות ריאה במודל עכבר סרטן שד שהוזרקו לו תאי 4T1, תאי סרטן שד גרורתיים מאוד, הכינו תרחיף תאים, כולל תאי 4T1, שבודדו מהריאות שנקטפו. צנטריפוגה את המתלה והשעיה מחדש של התאים במדיה המכילה 6-תיוגואנין, 6-TG - אנלוגי גואנין. זרע את תרחיף התאים בצלחת תרבית.
6TG נכנס לתאים נורמליים שבהם אנזים טרנספראז ספציפי ממיר אותו לנוקלאוטיד 6-TG, נוקלאוטיד רעיל. נוקלאוטידים ציטוטוקסיים אלה משולבים ב-DNA, גורמים לנזק ל-DNA, ומסלקים באופן סלקטיבי תאים מהתרבית. לתאי 4T1 יש יכולת מופחתת ליצור נוקלאוטידים רעילים, מה שמקל על הישרדותם והיצמדות לצלחת. בהתאם ליכולת ההתפשטות של התאים, הם יוצרים מושבות.
טפל בתאים במתנול. מתנול מחלחל לתאים ומנטרל את החלבונים התאיים. דגרו את התאים עם מתילן כחול.
הצבע הטעון חיובית נכנס לתא, מקיים אינטראקציה עם ה-DNA הטעון שלילית, ומתחבר לחללים בין זוגות הבסיסים הסמוכים של גדילי ה-DNA. זה גם נקשר ל-RNA בציטופלזמה, אך עם זיקה נמוכה יותר. הגרעינים צובעים בכחול כהה בגלל ריכוז DNA גבוה מאשר הציטופלזמה בגלל ריכוז ה-RNA הנמוך. מושבות גרורתיות מופיעות כנקודות כחולות.
דמיינו את הצלחת. השתמש בתוכנה כדי לקבוע את המושבות הגרורתיות, לכמת את העומס הגרורתי בריאות העכבר.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים