JoVE Encyclopedia of Experiments
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 2:27 דק' • July 8th, 2025
לצביעת סחוס, התחל עם קטע סחוס קבוע בפורמלין, משובץ פרפין מעכבר שעבר המתת חסד.
ראשית, טבלו את הדגימה בתחליף הקסילן - חומר ניקוי לא מסוכן המסיר את שעוות הפרפין וחושף את הרקמה המיובשת. לאחר מכן, טפל בדגימה בריכוזי אתנול יורדים כדי להחזיר לחות לרקמה לצביעה שלאחר מכן.
כעת, צבעו את הדגימה בהמטוקסילין הברזל של וייגרט - כתם אורגני המכיל יונים ברזליות - ודגרו לזמן קצר. מולקולות ההמטוקסילין יוצרות קומפלקסים עם יונים ברזליים וחודרות לתא. היונים הברזליים פועלים כמורדנט ומקלים על קשירת ההמטוקסילין לחומצות הגרעין, ומעניקים להן צבע כחול.
לאחר מכן, טפלו בדגימה בצבע הירוק המהיר - כתם נגדי שנקשר לרקמת החיבור ומעניק צבע ירוק. לאחר מכן, טפל בדגימה בתמיסת חומצה אצטית כדי לייצב את מולקולות הצבע. לבסוף, מכתימים את הדגימה בספרנין-תפוז - צבע קטיוני - ודוגרים.
מולקולות הספרנין הטעונות חיובית נודדות לעבר הפרוטאוגליקנים הטעונים שלילית בסחוס ונקשרות אליהם, מה שמעניק צבע אדום. לאחר מכן, הרכיב את השקופית במדיום שרף ודמיין אותה תחת מיקרוסקופ.
סחוס בריא נראה אדום מאוד בגלל המטריצה החוץ-תאית העשירה בפרוטאוגליקן, בעוד שסחוס לא בריא נראה פחות אדום עם סימני נזק לרקמות.
כדי לבצע צביעת Safranin-O, תחילה יש להסיר את השקופיות באוקסילן למשך שלוש עד חמש דקות, ולחזור על אמבט האוקסילן פעמיים. לאחר מכן, הרטיבו את המגלשות בשיפוע אתנול, וסיימו במים מזוקקים. לאחר מכן, הנח את השקופיות דרך תמיסת ההמטוקסילין ברזל של וייגרט, תמיסה ירוקה מהירה של 0.05%, תמיסת חומצה אצטית של 1% ותמיסת ספרנין-O של 0.1%. כעת, הרכיבו את השקופיות באמצעות מדיום שרף.