צביעת קרזיל ויולט של קטעי רקמות: הליך צביעה להדמיית סחוס ועצמות בחלקי עוברים קפואים של עכבר

כדי לדמיין אזורי סחוס ועצם בקטע רקמה, התחל עם שקופית זכוכית הנושאת קטע דק של רקמת עובר עכבר קפוא מעניין.

הפשירו לזמן קצר את ההקפאה וטבלו אותה בריכוז אתנול מתאים כדי להסיר את המדיום המוטמע בהקפאה. שלב ההסרה מסייע במניעת התרופפות המדיום, מה שעלול להשפיע על הדמיית הרקמות במהלך הצביעה. בנוסף, אתנול מקבע את הרקמה, שומר על מורפולוגיה ושלמות הרקמות.

לאחר מכן, פיפטה תמיסת סגול קרסיל על הרקמה. סגול קרזיל, צבע בסיסי בעל מטען חיובי, נקשר לחלקים פוליאניונים כגון פרוטאוגליקנים במטריצת רקמת הסחוס. ואילו ברקמה מינרלית כמו עצמות, הוא מגיב עם קבוצות טעונות שלילית כמו קבוצות פוספט במטריצת העצם.

בהיותו צבע מטכרומטי, סגול קרזיל מכתים אזורים שונים של הרקמה בצבעים שונים מהצבע הטבעי בהתבסס על האינטראקציה שלו עם מרכיבים כימיים שונים באזורים אלה.

כעת, שטפו את הרקמה בריכוז אתנול מתאים כדי להסיר עודפי כתם. טבלו את הרקמה בריכוזי אתנול הולכים וגדלים כדי להחליף את המים מהרקמה, ולייבש את הרקמה. שטפו את הרקמה עם קסילן כדי לעקור אתנול, מה שהופך את הרקמה לשקופה למיקרוסקופיה.

תחת מיקרוסקופ אור, רקמת הסחוס נראית מג'נטה ואילו רקמת העצם נראית חומה, מה שמקל על הבידול ביניהם כמו גם מהרקמה שמסביב.

הכן שלושה צינורות צנטריפוגה מסומנים בנפח 50 מיליליטר. הוסף 45 מיליליטר של 80% אתנול לכל צינור. מניחים שלושה צינורות על קרח. הנ