צביעת קריסטל ויולט: טכניקה לדמיין תאים סרטניים עמידים לתרופות באמצעות מבחני היווצרות מושבה

באוכלוסיית תאי גידול הטרוגנית, טיפול בתרופה אנטי-סרטנית יהרוג את רוב התאים, אך תאים עמידים לתרופות שורדים, וכתוצאה מכך כישלון טיפולי.

כדי לקבוע את שיעור התאים העמידים לתרופות, זרע אוכלוסיית תאי גידול הטרוגנית בצלחת מרובת בארות. דגירה כדי להקל על היצמדות התאים. הוסף ריכוז הולך וגדל של תמיסת תרופה אנטי סרטנית מתאימה.

אינטראקציה עם מולקולות תרופות גורמת לתאים רגישים למות וכתוצאה מכך להתנתק מלוחות התרבית. לעומת זאת, תאים עמידים לתרופות שורדים ונשארים מחוברים לצלחת.

שאפו את המדיה המושקעת כדי להסיר את התאים המנותקים. הוסף מדיה טרייה ללא תרופות ודגר את הצלחת בתנאים פיזיולוגיים. התאים העמידים לתרופות מתרבים ויוצרים מושבות גידול. כעת, הוסיפו תמיסת צביעה סגולה קריסטל למושבות ודגרו.

סגול קריסטל, כתם בצבע סגול, חדיר לממברנה, טעון חיובית, נכנס לתאים וקושר חלבונים אניוניים ו- DNA, ובכך מעניק צבע סגול לתאים.

לאחר מכן, הוסף אתנול כדי להמיס את הכתם שלא הגיב. שטפו כדי להסיר כתם עודף וייבשו את הצלחת באוויר.

מושבות עמידות לתרופות מופיעות כנקודות סגולות. ספרו את מספר המושבות הצבעוניות בכל באר. מייצגים את אחוז כדאיות התאים בגרף כדי לקבוע את שיעור תאי הסרטן העמידים לתרופות בכל ריכוז תרופה.

בהליך זה, צלחת 2000 תאים, תוך שימוש ב -2 מיליליטר מדיה לבאר, בצלחות 6 הבארות. לאחר 24 שעות, הוסף ריכוזים הולכים וגדל