צביעת כסף פלואורסצנטית: טכניקה להמחשת סך החלבון בג'ל פוליאקרילאמיד

צביעת כסף פלואורסצנטית של חלבונים בג'לים פוליאקרילאמיד משתמשת בבדיקות פלואורוגניות כדי לזהות ולכמת את החלבונים.

התחל עם ג'ל פוליאקרילאמיד עם חלבונים, מופרדים לרצועות באמצעות אלקטרופורזה. משרים בתערובת מקבעת של אתנול וחומצה אצטית, המונעת מהרצועות להתפזר על ידי דנטורציה של החלבונים.

שטפו את הג'ל כדי להסיר שאריות חומצה אצטית ואתנול. טבלו את הג'ל בכתם חנקתי כסף. יוני כסף נקשרים חזק לקבוצות טעונות שלילית בחלבונים.

דגירה בחושך. שטפו את הג'ל במים טהורים במיוחד כדי להסיר קומפלקסים של יוני כסף לא קשורים.

טבלו את הג'ל בתמיסה מתפתחת המכילה בדיקה פלואורוגנית רב-רכיבית - TPE-4TA. בדיקה אניונית זו מכוונת ליוני כסף הקשורים לחלבון, ויוצרים אגרגטים בלתי מסיסים המפעילים את התכונות הפלואורוגניות של הגשושית, ובכך מקנים פלואורסצנטיות.

מכיוון שהפעלת הקרינה תלויה בצבירה, הבדיקות הלא קשורות אינן פולטות שום אות, מה שמאפשר צביעת חלבון כוללת עם פליטת רקע מופחתת.

דגרו את הג'ל בחושך בתסיסה עדינה, מה שמבטיח התפתחות פלואורוגנית מלאה. העבירו את הג'ל במאגר דיסטנט כדי להסיר בדיקות לא קשורות. לבסוף, דמיין את הג'ל כדי להשיג את עוצמת אות הלהקה. שרטט את עוצמת אות הקרינה מול עקומת החלבון הסטנדרטית כדי לחשב את הכמות הכוללת של חלבונים בדגימה.

לאחר האלקטרופורזה, יש לטבול את הג'ל בתמיסה של 100 מיליליטר המכילה אתנול וחומצה א