צביעת טיפות שומנים של Oenocytes Drosophila זחל: טכניקה להערכת הצטברות טיפות שומנים במצב רגיל ולחוץ באמצעות צבע מבוסס BODIPY

אואנוציטים של זחלי דרוזופילה הם תאים מיוחדים המתחברים בצורה של אשכולות נפרדים על פני השטח הבסיסיים של האפידרמיס הרוחבי - שכבת העור השטחית. אואנוציטים אלה מעורבים בעיקר בחילוף החומרים של שומנים.

במהלך רעב, האונוציטים האלה צוברים טיפות שומנים עודפות. כל טיפה מורכבת מליבה הידרופובית של ליפידים ניטרליים, כגון טריגליצרידים ואסטרי כולסטרול, המוקפת בשכבה חד-שכבתית של פוספוליפידים.

כדי לדמיין את טיפות השומנים, קח קטע מנותח של אפידרמיס זחל דרוזופילה עם אונוציטים מחוברים. טפל עם חוצץ קיבוע המכיל פרפורמלדהיד כדי לקשר בין החלבונים התאיים כמו פרוטאזות ולשמור על השלמות המבנית של האואנוציטים. הסר את מאגר הקיבוע. יש לדגור עם צבע פלואורסצנטי על בסיס BODIPY בחושך כדי למנוע פוטוהלבנה.

במהלך הדגירה, הצבע הלא-קוטבי מתפזר על פני קרום התא של האואנוציטים וחוצה את השכבה החד-שכבתית המקיפה את טיפות השומנים. ההידרופוביות של מולקולות הצבע מאפשרת את תנועתן לתוך הליבה הלא קוטבית של טיפות השומן כדי לקשור את השומנים הנייטרליים.

הרכיבו את הדגימה על שקופית, כאשר האונוציטים נוגעים בשקופית המיקרוסקופית להדמיה ברורה. אטום את הדגימה באמצעות כיסוי והתבונן תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

עם עירור על ידי אור כחול באורך גל של ארבעה תשעים ושלושה ננומטר, הצבע פולט פלואורסצנטיות ירוקה בחמש מאות ושלושה ננומטרים. כתמי פלורסנט ירוקים