אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:40 דק׳ • July 8th, 2025
במהלך איסכמיה מוחית, פגיעה בזרימת הדם למוח מפחיתה את אספקת החמצן והחומרים המזינים לרקמה, וגורמת לנזק מוחי. לאחר איסכמיה קצרה, כאשר זרימת הדם למוח משוחזרת, רפרפוזיה עם אספקת חמצן מוגברת גורמת לייצור יתר של מיני יונים תגובתיים, מה שמוביל לנזק לרקמות חמצוניות, המכונה פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה.
כדי להעריך נזק מוחי בעקבות פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה במודל חולדה, ראשית, קצרו את מוח החולדה. שוטפים במאגר מקורר כדי להסיר פסולת ודם. חתכו את המוח כדי לקבל פרוסות עטרה בעובי הרצוי. העבירו בזהירות את הפרוסות למגש המכיל חיץ - כאשר המשטחים הקדמיים פונים כלפי מעלה - לצביעה לאחר מכן.
הוסיפו תמיסה של טריפניל טטרזוליום כלוריד חם, TTC, צבע חמצון חיזור מסיס במים, על פרוסות המוח. דגירה בתנאי חושך, מכיוון ש-TTC רגיש לאור. TTC נכנס לתאים בתוך קטע הרקמה.
בתאים חיים, אנזים מיטוכונדריאלי פעיל של סוקסינט דהידרוגנאז בנוכחות קופקטורים מפחית את ה-TTC, חסר צבע כאשר הוא מתחמצן, לפורמזן אדום בלתי מסיס במים, ומכתים תאים ברי קיימא באדום עמוק. עם זאת, תאים נמקיים חסרים פעילות דהידרוגנאז; לפיכך, TTC נשאר בצורה מחומצנת, ומכתים את התאים בלבן.
לאחר הדגירה, העבירו את פרוסות המוח למגש הדמיה. הפרד את ההמיספרות במישור הסגיטלי. דמיינו את פרוסות המוח.
רקמה בריאה נראית אדומה, בעוד רקמה פגומה נראית לבנה, מה שמבדיל בין רקמה נמקית לרקמה ב
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים