אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:37 דק׳ • July 8th, 2025
אוסטאובלסטים הם תאים יוצרי עצם המפרישים שלפוחיות קטנות לתוך המטריצה החוץ-תאית שלהם, ECM. שלפוחיות אלה, הנקראות שלפוחיות מטריצה, מצוידות במובילי ממברנה ואנזימים המאפשרים כניסת יוני סידן ופוספט, ויוצרים גבישים מינרליים בתוכם. כאשר גבישים מצטברים, הם פורצים את קרום השלפוחית ויוצרים גושים מינרליים ב-ECM, המרכיבים את צפיפות המינרלים בעצם.
כדי לדמיין מינרליזציה, התחל עם תאי אוסטאובלסטים על פיגום תואם ביולוגית במדיום גידול מתאים. האוסטאובלסטים מתחברים לפיגום ומשתמשים בגורמי גדילה מהמדיום כדי להפריש שלפוחיות מטריצה היוצרות לאחר מכן גושים מינרליים ב-ECM.
שאפו את מדיום התרבות ושטפו את התאים כדי להסיר עקבות מדיה. טפל בתאים בתמיסת פורמלין, הגורמת לקישור צולב של ECM, קיבוע ושימור מבנה הרקמה. שטפו את התאים כדי להסיר את כל הפורמלין שנותר.
לאחר מכן, הוסף תמיסת מכתים אדומה של אליזרין ודגר את התרבות. מולקולות הצבע נקשרות לגוש המינרלי ומתחברות לסידן, מינרל עצם מרכזי, ויוצרות קומפלקסים מוכתמים גדולים.
שאפו את תמיסת הצביעה ושטפו היטב כדי להסיר כל צבע לא כרוך. כאשר הם נצפים במיקרוסקופ, מרבצי המינרלים העשירים בסידן מופיעים כגושים אדומים בהירים ב-ECM, מה שמעיד על מינרליזציה על ידי האוסטאובלסטים.
מדיום תרבית שאיבה מאוסטאובלסטים ראשוניים, 14 יום לאחר הוספת מדיום מינרליזציה אוסטאוגני. שוטפים פעמיים עם 0.5 מי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים