צביעת כסף של גליקוזאמינוגליקנים סולפטים: שיטת צביעה להדמיה של גליקוזאמינוגליקנים סולפטים בג'לים פוליאקרילאמיד

גליקוזאמינוגליקנים סולפטיים, GAGs, הם פוליסכרידים ליניאריים ארוכים, טעונים שלילית, עם שרשראות יחידות דו-סוכריות חוזרות וסולפטיות במיקומים שונים, הקיימות באורכים משתנים.

כדי לדמיין GAGs סולפטיים מבודדים בעלי עניין שונים באורך השרשרת בג'ל פוליאקרילאמיד לאחר אלקטרופורזה, הסר בזהירות את הג'ל מהקסטה שלו. שוטפים במים נטולי יונים, מסירים חתיכות ג'ל מחוברות שעלולות להפריע להכתמה.

טפל בתמיסה כחולה אלציאנית חומצית. בתנאים חומציים, כחול אלציאני, צבע קטיוני רב-ערכי עם אטום נחושת במרכזו, מקיים אינטראקציה ספציפית עם GAGs טעונים שלילית באמצעות אינטראקציות יוניות, ויוצר קומפלקס כחול עמוק שאינו מסיס במים.

שטפו את הג'ל במים נטולי יונים ומתנול, והסירו כל כתם שנותר. דגרו את הג'ל בתמיסת כסף חנקתי אלקליין. בתנאים אלקליין, ה-GAGs הסולפטיים הכחולים של Alcian מספקים אתרים ליוני כסף טעונים חיובית להיקשר וליצור קומפלקס.

טפלו בג'ל בתמיסה מתפתחת המכילה פורמלדהיד וחומצת לימון. חומצת לימון מורידה את ה-pH המקומי לפעילות אופטימלית של פורמלדהיד, מה שמפחית את יוני הכסף לכסף מתכתי בלתי מסיס בתוך שברי ה-GAG הסולפטיים, ומגביר את האות הכחול האלציאני.

הוסף תמיסת עצירה להורדת ה-pH, ומניעת הפחתת יוני כסף למינימום כתמי רקע. עכשיו, דמיינו את הג'ל.

רצועות שברי GAG גופרתיים מוכתמים בכחול-כסף אלצ'י מופיעות בצבע חום כהה או שחור,