אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 2:42 דק׳ • July 8th, 2025
פרוטאוגליקנים מורכבים מחלבון ליבה המחובר קוולנטית לשרשראות גליקוזאמינוגליקן סולפטיות.
כדי לדמיין פרוטאוגליקנים, התחל עם פיגומים מבוססי קולגן - המצע הפולימרי הנקבובי - וזרע עליהם את תאי הגזע המזנכימליים, או MSC, תרחיף עליהם. זה מספק תמיכה מבנית ל-MSCs ומאפשר להם לגדול על פני השטח כמו גם בתוך חללי הפיגומים.
לטפל במבנים במדיום התמיינות כונדרוגני המכיל גורמי גדילה משתנים המניעים את הטרנספורמציה של MSCs לכונדרוציטים בוגרים - תאים סחוסיים. כונדרוציטים בוגרים מפרישים פרוטאוגליקנים היוצרים רשת עם הקולגן בפיגום.
קח קטע שהוכן מהמבנה עמוס הכונדרוציטים. הוסף תמיסה חומצית של כתם כחול אלציאני בתוספת גואנידיום הידרוכלוריד ודגירה. במהלך הדגירה, הגואנידין הידרוכלוריד בתמיסת הצבע מפרק כל אגרגטים פרוטאוגליקניים לצביעה טובה יותר.
לאחר מכן, הגליקוזאמינוגליקנים הסולפטיים הטעונים שלילית מהפרוטאוגליקנים נקשרים למולקולות הצבע הכחול האלציאני המכילות נחושת טעונות חיובית, וכתוצאה מכך משקעים כחולים.
לאחר מכן, טבלו את השקופית בתמיסה מעכבת המכילה מגנזיום כלוריד. יוני המגנזיום מתחרים עם מולקולות הצבע הטעונות חיובית על אתרי הקישור על הגליקוזאמינוגליקנים, ובכך מונעים צביעת יתר.
דמיינו את הקטע. צבע כחול מאשר את נוכחותם של פרוטאוגליקנים בדגימה
כדי לבצע התמיינות כונדרוגנית ממכשיר רפואי בצורת ספוג המורכב מקולגן ליופילי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים