JoVE Encyclopedia of Experiments
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 2:50 דק' • July 8th, 2025
אפיתל החצוצרות מורכב מתאי הפרשה המייצרים נוזל עשיר בחומרים מזינים ותאים ריסניים המניעים את הביצית שטוף הנוזל לכיוון הרחם. שינויים מורפולוגיים ואובדן תפקודי בתאי חצוצרות קשורים לסרטן החצוצרות.
כדי לדמיין מורפולוגיה של צינורות, קח שקופית מרוחה ברקמות וטבל אותה באתנול כדי לתקן את התכונות הציטולוגיות שלה. שטפו את השקופית במים כדי להסיר עודפי קיבוע.
כעת, טבלו את השקופית בהמטוקסילין, צבע קטיוני הקושר את הדנ"א הטעון שלילית, ומכתים את הגרעין בכחול. שטפו את השקופית במים ואחריה אתנול כדי למנוע כתמי יתר.
לאחר מכן, טבלו את השקופית בצבע Eosin Azure - תמיסה פוליכרומית של חום ביסמרק, Eosin Y וירוק מהיר מעורבב בחומצה פוספוטונגסטית. חום ביסמרק מזרז חומצה פוספוטונגסטית, מורדנט המשמש את Eosin Y, וירוק מהיר לצביעה דיפרנציאלית של תאי צינורות לא סרטניים ותאי סרטן פעילים מטבולית.
חזור על שלב השטיפה במים-אלכוהול. לבסוף, טבלו את השקופית בקסילן - חומר ניקוי המסיר את רכיבי הכתמים העודפים. לאחר מכן, הרכיב את השקופית ודמיין אותה תחת מיקרוסקופ.
אפיתל החצוצרות הרגיל מופיע כשכבה מאורגנת של תאים מוכתמים בתכלת, ריסניים ומפרישים. לעומת זאת, התאים הממאירים באפיתל מופיעים כאשכולות תאים עם גרעינים כהים.
לפני צביעת התאים, טען את בקבוקון הדגימה למעבד אוטומטי להכנת שקופיות. כאשר השקופיות מוכנות, טבלו את הדגימות ב-95% אתנול, 10 פעמים, למשך שנייה אחת לכל טבילה, ולאחר מכן 10 טבילות במים, למשך שנייה אחת לכל טבילה.
לאחר מכן, טבלו את המגלשות בהמטוקסילין למשך 10 עד 60 שניות, ולאחר מכן שטיפה שנייה של מים-אתנול. לאחר טבילת האתנול האחרונה, טבלו את המגלשות ב-Eosin Azure למשך 1 עד 3 דקות, ולאחר מכן שטיפת אתנול מים נוספת. לאחר מכן, טבלו את השקופיות בקסילן; עד שהדגימות יתבהרו.