JoVE Encyclopedia of Experiments
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:03 דק' • July 8th, 2025
בחלודת קפה, נבגים של Hemileia vastatrix - פטרייה פתוגנית - נוחתים על פני הצמח ומגדלים צינור נביטה, ובכך יוזמים זיהום דרך הקורים.
קורים אלה מתפשטים בתוך הרקמה ופולשים לתאי הצמח דרך מבנים מיוחדים דמויי אצבעות הנקראים האוסטוריה, הסופגים את חומרי המזון של הצמח. האוסטוריה גם מפרישה מולקולות אפקטור המזוהות על ידי חלבוני העמידות של הצמח, מה שמוביל למעטפת עשירה בפקטין של האוסטוריה כדי להגביל את הזיהום.
כדי לדמיין את האינטראקציה הזו, התחל עם קטע עלי קפה אולטרה-דק, משובץ שרף, נגוע. כעת, טפל בדגימה בכחול כותנה לקטופנול - כתם היסטולוגי המורכב מפנול, חומצה לקטית, גליצרול וכחול כותנה. מחממים את השקופית לזמן קצר.
כאשר רכיבי הצבע חודרים לרקמה, הפנול מסלק אורגניזמים חיים, בעוד שחומצה לקטית וגליצרול עוזרים לשמר את הארכיטקטורה התאית. במקביל, מולקולות הכותנה הכחולות נקשרות לחלקיקי הכיטין בדופן התא הפטרייתי ומכתימות אותו בכחול.
שוטפים את הדגימה במים מזוקקים. לאחר מכן, טפל בדגימה בצבע אדום רותניום.
מולקולות הרותניום הטעונות חיובית נקשרות לפוליסכרידים הטעונים שלילית בדופן התא הצמחי העשיר בפקטין ומכתימות אותו באדום. שוב, שטפו את השקופית ודמיינו תחת מיקרוסקופ.
דופן התא הצמחי העשירה בפקטין נראית אדומה, ומכילה את האוסטוריה הכחולה המשתרעת מקורי הפטרייה הכחולים.
חותכים את הבלוק לחלקים בעובי 5 מיקרומטר באמצעות מיקרוטום סיבובי המצויד בלהבי פלדה בגודל 8 סנטימטרים. הנח את החלקים על מגלשות זכוכית מכוסות במים מזוקקים, ולאחר מכן, העביר את המגלשות לפלטה חמה לייבוש ב-40 מעלות צלזיוס, וקדם את הידבקות החלקים למגלשות הזכוכית.
לאחר הייבוש, סמן את שקופיות הזכוכית עם שם הפניה לבלוק ומספר השקופית. מכסים את החלקים ב -2 מיליליטר של 5% כותנה כחולה בלקטופנול, ומחממים אותם על פלטה חמה בחום של 45 מעלות צלזיוס למשך חמש דקות.
הסר את עודפי הצבע על ידי שטיפת השקופית שלוש פעמים בכוס מלאה במים מזוקקים. מכתים אותו ב-2 מיליליטר של 0.01% רותניום אדום במים למשך דקה אחת.
הסר את עודפי הצבע על ידי שטיפת השקופית שלוש פעמים בכוס מלאה במים מזוקקים. שים טיפת מים מזוקקים על החלקים, וכסה את החלקים בכיסוי לביצוע ניתוח מיקרוסקופיה קלה.