JoVE Encyclopedia of Experiments
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 2:49 דק' • July 8th, 2025
פיברוזיס הוא תצהיר מוגבר של קולגן סיבי במטריקס החוץ-תאי של הרקמה הפגועה. מבחינה מבנית, הוא מורכב משרשראות פוליפפטיד קולגן בעלות סליל משולש
.כדי להכתים קולגן בצבע אדום פיקרוסיריוס, קח קטע רקמת לב קבוע פרפורמלדהיד, משובץ בפרפין. טבלו את קטע הרקמה בקסילן - ממס אורגני - כדי להמיס את השעווה שמסביב.
טפל ברצף ברקמה הפירוקה בריכוזי אלכוהול יורדים כדי להחליף את הקסילן. טבלו את הרקמה במים כדי להחזיר לה לחות להדמיית כתמים טובה יותר בשלבים הבאים.
טבלו את הרקמה בתמיסה אדומה פיקרוסיריוס המכילה סיריוס אדום - צבע אזו אניוני - וחומצה פיקרית.
סיריוס אדום מכיל קבוצות סולפוניות חומציות המקיימות אינטראקציה עם קבוצות האמינו הבסיסיות של ליזין, הידרוקסיליזין וארגינין הקיימות בקולגן. החומצה הפיקרית מסייעת בשמירה על ה-pH החומצי, ומקלה על קשירת מולקולות הצבע בכיוון מקביל לקולגן.
שוטפים את השקופיות בתמיסת הימנעות מחומצת להסרת כתמים עודפים. שים טיפה של אמצעי הרכבה על השקופית וצפה בה תחת מיקרוסקופ שדה בהיר.
האזור הפיברוטי המכיל קולגן נראה אדום בוהק בהשוואה לאזורים הלא פיברוטיים בצבע צהוב.
לאחר קיבוע רקמת הלב, הניחו אותה על מכשיר חיתוך רקמות, חתכו אותה לפרוסות בעובי 2 מילימטר והניחו את החלקים בקלטת הטמעה.
לאחר הטמעת פרפין וחתך נוסף על פי פרוטוקול הטקסט, הפחיתו את השקופיות על ידי הנחתן במיכל עם קסילן למשך 30 דקות. לאחר מכן, החזירו לחות לרקמה בסדרת אלכוהול מדוללת ברצף, ואחריה מים מזוקקים.
לאחר מכן, השתמש בתמיסה אדומה מספקת של פיקרוזיריוס כדי לכסות לחלוטין את חלקי הרקמות, ולדגור למשך שעה. לאחר מכן, השתמש בתמיסת חומצה אצטית של 0.5% כדי לשטוף את השקופיות פעמיים, ולשטוף את הדגימות פעמיים באלכוהול מוחלט.
יבש את הדגימות באוויר והרכיב אותן בשרף סינטטי עם כיסוי. לאחר מכן, השתמש באור נראה מתחת למיקרוסקופ בהגדלה של פי 200 כדי לצלם את השקופיות.