צביעת סודן IV: הליך להכתמת רבדים טרשתיים עמוסי שומנים בקשת אבי העורקים של עכבר שנקטף

טרשת עורקים מתרחשת עקב הצטברות של ליפופרוטאינים בציפוי הפנימי של העורקים, וכתוצאה מכך הצטברות פלאק, עיבוי והיצרות העורקים וזרימת דם מופחתת.

הפלאקים מורכבים מכובע סיבי עם תאי שריר חלק ומטריצה חוץ-תאית, הסוגרת ליבה המורכבת מליפופרוטאינים בצפיפות נמוכה, LDLs - חלקיקים כדוריים עם ליבה הידרופובית של אסטרי כולסטרול וטריגליצרידים, מוקפים בשכבה חיצונית פוספוליפידית - יחד עם תאים דלקתיים.

כדי להמחיש פלאקים טרשת עורקים עשירים בשומנים, השיגו קשת אבי העורקים של עכבר שזה עתה נקטפה. העבירו אותה לפלטפורמה מותאמת אישית לרקע כהה לשיפור הניגודיות במהלך הדמיה בשטח רחב. הוסיפו בופר כדי למנוע התייבשות רקמות.

הסר את רקמת השומן הפרי-וסקולרית המקיפה את קשת אבי העורקים כדי למנוע כתמי רקע כוזבים. חותכים את אבי העורקים וענפיו לאורך דרך הלומן כדי לחשוף את פני השטח הפנימיים ביותר עם הצטברות רובד טרשת עורקים.

אבטח את קשת אבי העורקים הפתוחה על הרציף ודגירה באתנול. אתנול עוקר מים מהרקמה, משבית חלבונים ושומר על ארכיטקטורת הרקמה.

טפל עם כתם סודאן IV מסיס בממיסים אורגניים. בתוך הפלאק, סודן IV, צבע דיאזו מסיס בשומן בעל זיקה גבוהה לטריגליצרידים ואסטרי כולסטרול של ליפופרוטאינים, עובר משלב הממס האורגני ונקשר לליבה ההידרופובית של השומנים של ה-LDL, ויוצר קומפלקסים יציבים. שטפו עודפי כתמים באמצעות אתנול.

תחת סטריאומיקרוסקופ, הפלאקים המוכתמים העשירים בשומנים נראים כתומים-אדומים, בעוד שהאזורים שאינם פלאק נראים חיוורים.

להכנת מצע הצמדה לניתוח פנים, קפלו קטע של סרט שעוות פרפין 8 פעמים ליצירת משטח שטוח בגודל 25X25 מילימטר, ועטפו סרט בידוד חשמלי שחור סביב הסרט כדי ליצור רקע כהה לאבי העורקים.

הנח תווית בצד האחורי של מיטת ההצמדה, והשתמש בעיפרון עופרת כדי לרשום את מספר זיהוי העכבר. העבירו את קשת אבי העורקים למיטת ההצמדה, והוסיפו טיפה של PBS לרקמה. בעזרת סטריאומיקרוסקופ, נקו את אבי העורקים מרקמת השומן הפרי-אדוונטיאלית שנותרה, והשתמשו במספריים של Vannas ובמלקחיים של Dumont כדי לקלף בעדינות את כל רקמת השומן שמסביב מבלי לתמרן או לפגוע באבי העורקים.

לאחר מכן, הכניסו את המספריים של Vannas ללומן אבי העורקים כדי לחשוף את המשטח האינטימי. התחל לחתוך את העקמומיות החיצונית של הקשת העולה בכיוון הדיסטלי, המשך לחתוך את הענפים, כולל העורק הברכיוצפלי, ולחסוך את החלק הגבי של אזור בית החזה היורד.

כדי להציג את המשטח האינטימי, חותכים את העקמומיות הקטנה יותר ומקפלים את אבי העורקים. בעזרת מחזיק מחט מיקרו Castroviejo, אבטח את הקשת הפתוחה למיטת ההצמדה עם הקצה הבוטה של סיכות חרקים זעירות מבלי למתוח את הדגימה, כופף בעדינות את הסיכות הרחק מהדגימה, כאשר הרקמה מוחזקת במקומה. לאחר מכן, אחסן את הקשת המוצמדת עם הפנים כלפי מטה בצלחת פטרי של PBS בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.

לצביעה של סודן IV, שטפו את הדגימה במשך 5 דקות בצלחת פטרי של 70% אתנול כשהקשת פונה כלפי מטה, לפני העברת הדגימה לצלחת של תמיסת עבודה של סודאן IV למשך 7 דקות.

בתום הדגירה, שטפו את הדגימה בשתי שטיפות של 3 דקות באתנול 80% כדי להסיר את הכתמים מהמשטח האינטימי הרגיל ולאחר מכן שטיפה אחרונה ב-PBS, לפני החזרת הרקמה לצלחת הפטרי המקורית שלה. לאחר מכן, רכשו מיקרוגרפים תחת סטריאומיקרוסקופ המחובר למצלמה דיגיטלית בהגדלה של פי 10, וקבלו תמונות של הקשת המוצמדת שקועה ב-PBS, תוך שימוש במשקולות מתכת קטנות כדי להחזיק את מצע ההצמדה לתחתית צלחת הפטרי.