אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 2:30 דק׳ • July 8th, 2025
בצמחים, ליגנין - ביופולימר מורכב - מופקד בדרך כלל בדפנות התא של הרקמות כדי לספק תמיכה.
ליגניזציה נמצאת בעיקר בעיבוי דופן התא המשני של תאי קסילם מוליכי מים, כגון כלי דם וסיבים, ובתאים החוץ-קסילריים, כגון סיבים בין-פאסיקולריים.
מבחינה מבנית, ליגנין מורכב ממבשרי מונוליגנול צולבים. אלכוהולים ארומטיים אלה מתפלמרים ויוצרים מבנה מסועף מאוד. תכונה זו משפרת את חוזק הצמח וקשיחותו.
כדי לדמיין שקיעת ליגנין באמצעות צביעת ויזנר, קח חתכי גבעול דיקוט משובצים באגרוז שמקורם בחלקו האמצעי או התחתון של הצמח. הוסף אותם לצינור מיקרו-צנטריפוגה המכיל מאגר מתאים.
הוסף את תמיסת הכתמים המוכנה, המכילה את הפלורוגלוצינול והאתנול המחומצים, לקטעי הגבעול. האלכוהולים הקיימים בליגנין מגיבים עם הפלורוגלוצינול והאתנול כדי לייצר פיגמנט ורוד. התוצאה היא התפתחות של צבע ורוד המתאים לתצהיר הליגנין בדפנות התא של תאים מיוחדים.
כעת, העבירו את החלק המוכתם לשקופית מיקרוסקופית. הנח בעדינות כיסוי מעל הקטע, הימנע מבועות, כדי לעזור לדמיין אותו טוב יותר. דמיין את החלקים תחת מיקרוסקופ אור.
הצבע הוורוד בתאי הקסילם המיוחדים ובסיבים הבין-פאסיקולריים בחתכי הגזע מאשרים את נוכחותו של ליגנין ברקמות אלה.
לצורך צביעת פלורוגלוצינול, העבירו את חלקי הגבעול לצינור מיקרו-צנטריפוגה. הוסף 1 מיליליטר מתמיסת הפלורוגלוצינול לצינור, וכסה אותו מיד מכיוון שהחומצה ההידרוכלורית בכתם הפלורוגלוצינול קורוזיבית מאוד. הזז בעדינות את הצינור כדי לוודא שכל החלקים מוכתמים. פיפטה בעדינות את החלקים לקצה פיפטה חתוך, ועל שקופית מיקרוסקופ. מכסים את החלקים בכיסוי. שימו לב לקטעים תחת תאורת שדה בהיר. התמיסה מתייבשת תוך 5 עד 10 דקות וגורמת להידרדרות של הדגימות, ולכן יש להשלים את ההדמיה בתוך פרק זמן זה.