JoVE Encyclopedia of Experiments
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 2:44 דק' • July 8th, 2025
ליגנין הוא מרכיב מבני חשוב בדופן תא הצמח. זהו פולימר המורכב בעיקר מאלכוהולי סירינגיל, או יחידות S-ליגנין, ואלכוהולי גואיציל, או יחידות G-ליגנין, ואוכלוסייה קטנה של אלכוהולים פרה-קומריל הנקראים יחידות H-ליגנין.
תכולת ה-S-ליגנין שונה ברקמות צמחים משניות שונות. הוא נמצא בעיקר בכלי הקסילריה ובסיבים ובסיבים הבין-פאסיקולריים, שם הוא מספק תמיכה מבנית.
כדי לזהות נוכחות של S-ליגנין, קח חתכי גבעול דיקוט משובצים באגרוז בשפופרת. טפל בקטעי הגבעול ברצף בתמיסת צביעת אשלגן פרמנגנט, ואחריה חומצה הידרוכלורית מדוללת, ולבסוף, עם אמוניום הידרוקסיד - בסיס חלש.
במהלך טיפול זה, חלק ה-S-Lignin הקיים בדופן התא עובר סדרה של שינויים כדי ליצור לבסוף תוצר שנראה אדום.
עוצמת הצבע האדום נמוכה יותר בתאי הקסילם בשל נוכחותו של פחות S-ליגנין בהשוואה לסיבים הבין-פאסיקולריים, הנראים בצבע אדום עמוק יותר. העבירו את החלקים לשקופית, ודמיינו אותם תחת מיקרוסקופ אור.
השונות בעוצמת האדום עוזרת להבין את היחס היחסי של S-ליגנין ברקמות צמחים מחוספסות.
לצורך צביעת Maule, העבירו את חלקי הגבעול לצינור מיקרוצנטריפוגה. הוסף 1 מיליליטר מתמיסת האשלגן פרמנגנט 0.5% לצינור המכיל את החלקים. פיפטה את תמיסת האשלגן פרמנגנט 0.5% למעלה ולמטה בעדינות, רצוי, מבלי להפריע לקטעים.
לאחר דגירה של 2 דקות ופיפטינג חוזר, הניחו לצינור המיקרו-צנטריפוגה לעמוד עד שכל החלקים יתייצבו. בעזרת פיפטה של 1 מיליליטר, שולפים 700 מיקרוליטר של תמיסת אשלגן פרמנגנט של 0.5%. הוסף 700 מיקרוליטר מים מזוקקים כדי לשטוף את האשלגן פרמנגנט. חזור על הפעולה שלוש עד ארבע פעמים או עד שתמיסת המים נשארת צלולה.
לאחר השלכת המים, יש להוסיף במהירות 1 מיליליטר של חומצה הידרוכלורית 3% עד לשחרור הצבע החום העמוק מהחלקים. זה עשוי לקרות תוך 3 עד 5 דקות או עשוי לדרוש שתי שטיפות של 5 דקות כל אחת. הוצא את כל תמיסת החומצה ההידרוכלורית 3% והוסף מיד 1 מיליליטר של תמיסת אמוניום הידרוקסיד מרוכזת לפני הדמיה בתאורת שדה בהיר.