צביעה לבנה Calcofluor: שיטה פשוטה להדמיית פלואורסצנטיות הנגרמת על ידי UV של משקעי תאית בדפנות התא של קטעי גזע צמח דיקוט

בתאי צמחים, דופן התא, שכבת הגנה מיוחדת, מקיפה את קרום הפלזמה. דופן התא מורכבת בעיקר מתאית, פוליסכריד ליניארי ולא מסועף של מונומרים גלוקוז המקושרים מקצה לקצה באמצעות β-1, 4 קשרים גליקוזידיים.

תאית קיימת במצב מצטבר בצורה של מיקרו-סיבי תאית מסודרים אורתוגונלית, משובצים במטריצת המיצלולוז, פקטין וחלבון.

תאים מסוימים, כגון אלה של רקמת קסילם כלי דם וסיבים בין-פאסיקולריים, כוללים גם ליגנין, חומר התקשות, בדפנות התאים שלהם.

כדי לדמיין שקיעת תאית בדפנות תאי הצמח, התחל עם חתכים רוחביים משובצים באגרוז של גזע צמח דיקוט במאגר. הוסף תמיסה מימית של calcofluor white, צבע כימיפלואורסצנטי, מישורי. דגירה כדי לאפשר לצבע להתפזר לתוך הרקמה.

ברגע שנכנס פנימה, calcofluor white באמצעות הקבוצות הפונקציונליות של ההידרוקסיל שלו מקיים אינטראקציה ויוצר קשרי מימן עם קבוצות הידרוקסיל של מונומרים של גלוקוז בתאית. זה מביא את הצבע קרוב לתאית ומעדיף אינטראקציות נוספות של ואן דר ואלס, מה שמוביל לקומפלקס יציב של צבע-תאית.

העבירו את חלקי הגבעול למגלשת זכוכית והרכיבו כיסוי. תחת תאורת אור אולטרה סגולה, מולקולות הצבע הקשורות לתאית זוהרות בלבן בוהק.

תאים של האפידרמיס, קליפת המוח והגרעין מציגים פלואורסצנטיות עזה, עם קווי מתאר ברורים של דופן התא, עקב תכולת תאית גבוהה. לשם השוואה, תאים של קסילם וסיבים בין-פאסיקולריים זוהרים במעומעם, מה שעשוי להצביע על דיפוזיה לא מספקת של צבע עקב נוכחות ליגנין.

לצביעה לבנה של calcofluor, העבירו את חלקי הגבעול לצינור מיקרוצנטריפוגה, והוסיפו מיליליטר אחד של תמיסת calcofluor white 0.02%. פיפטה בעדינות את התמיסה למעלה ולמטה. המשך לדגור, ושטוף את החלקים כמפורט בפרוטוקול הטקסט לפני התבוננות בקטעים באור UV.