כרומטוגרפיית חילופי קטיונים: טכניקה לבידוד חלבון רקומביננטי מטרה מליזט תאי חרקים בהתבסס על מטען פני שטח נטו

0 צפיות3:33 דק' • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כרומטוגרפיה של חילופי קטיון מקלה על הפרדת חלבון מתערובות על סמך מטען פני השטח הנקי שלהן.

לבידוד חלבון מתמר אותות מטרה מליזאט חלבון תאי חרקים, השג ליזאט חלבון מטרה בדיאליזה המכיל חלבונים מזהמים אחרים. הוסף בופר המכיל נתרן כלורי כדי להפחית את צמיגות הליזאט ולשפר את מסיסות החלבון, מה שמסייע במניעת סתימת עמודות כרומטוגרפיות במהלך הריצה.

בנוסף, pH חיץ מתחת לנקודה האיזואלקטרית של חלבון המטרה, pI, שבו לחלבון יש מטען נטו אפס, מקל על קשירה של יוני מימן עודפים לקבוצות קרבוקסילט שליליות, מה שהופך את חלבון המטרה לטעון חיובית.

הרכיבו את העמודה הכרומטוגרפית המכילה חרוזי אגרוז צולבים המחוברים לקבוצות טעונות שלילית. הוסף מאגר מחייב כדי לאזן את העמודה ולמקסם אינטראקציות בין עמודה לחלבון. טען את הליזט המדולל על העמודה המאוזנת.

חלבוני מטרה בעלי מטען חיובי יותר מקיימים אינטראקציה ונקשרים בחוזקה לקבוצות הטעונות שלילית של העמודה מאשר חלבונים מזהמים בעלי מטען חיובי פחות.

שטפו את העמוד עם חיץ כדי להסיר חלבונים מזהמים טעונים שלילית. לאחר מכן, העבירו את מאגר הפליטה, תוך הגדלת חוזקו היוני בהדרגה.

בחוזק יוני נמוך, קיימת תחרות מינימלית בין היונים החיוביים והחלבונים עבור הקבוצות השליליות בעמודה, הפולטות חלבונים מזהמים בעלי קשר חלש ופחות טעונים חיובית. עם זאת, ככל שהחוזק היוני גדל, יוני מלח מתחרים בחלבוני מתמר אותות מטרה קשורים היטב ומפחיתים את האינטראקציות בין החלבונים לעמודה, ומסלקים אותם כשבר מטוהר.

הכן עמודת חילופי קטיון של 20 מיליליטר על ידי שטיפתה בשלושה נפחי עמודות של Buffer G, ולאחר מכן עם שלושה נפחי עמודות של Buffer F. לאחר מכן, יש לדלל 20 מיליליטר מהדגימה שעברה דיאליזה לריכוז נתרן כלורי סופי של 100 מילימולר, על ידי הוספת 20 מיליליטר של Buffer E, ולהחיל את הדגימה על עמודת ההחלפה.

זה קריטי לדלל את הכמות הקטנה של הדגימה במקום את כולה בבת אחת, ויש למרוח את הדגימות המדוללות על העמודה מיד לאחר הדילול כדי להגביל את המשקעים של החלבון.

המשך לטעון את העמודה בדגימה מדוללת טרייה ככל שהדילול הקודם מתקרב לסוף העומס. לאחר מכן, שטפו את העמודה לספיגה בסיסית 280 עם מאגר F, שבדרך כלל דרש שלושה נפחי עמודות.

יש להוציא את החלבון מהעמודה עם שיפוע של 400 מיליליטר ממאגר F ל-65% Buffer G, ולאסוף את הפליטה בשברים של 6 מיליליטר. לאחר השלמת השיפוע, המשך לשטוף את העמודה לקבלת נפחי עמודה נוספים של 1.5 עמודות של 65% Buffer G.

07:50

האיתור וההסרה של נוקלאז זיהום במהלך טיהור של אב טיפוס רקומביננטי קצפית וירוס Integrase

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:41

יונים כרומטוגרפיה (IEX) מצמידים מרובה זווית פיזור אור (MALS) עבור חלבון הפרדה ואפיון

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:14

טביעת אצבע כרומטוגרפית לפי התאמת תבניות לנתונים שנאספו על ידי כרומטוגרפיית גז דו-ממדית מקיפה

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:21

הידרופובי אוטומטי אינטראקציה כרומטוגרפיה טור בחירה עבור שימוש ב טיהור חלבון

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:28

טיהור סלקטיבי של חלבון חיידקי על ידי כרומטוגרפיה שלילית של חילופי יונים

סרטונים קשורים

0 צפיות

02:54

טכניקת כרומטוגרפיית זיקה לטיהור חלבון חיידקי רקומביננטי

סרטונים קשורים

0 צפיות

02:59

טיהור חלבונים מבוסס כרומטוגרפיה של Anion-Exchange: טכניקת הפרדה לבידוד חלבון מעניין מליזט חיידקי על בסיס מטען נטו

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:54

טיהור חלבונים מבוסס כרומטוגרפיה של ניקל: טכניקה לטיהור חלבונים רקומביננטיים מתויגים פוליהיסטידין מליזט תאי חיידקים

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:37

לכידת חלבון זיקה מורכבת מ בתאי יונקי Cryomilled

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:07

הערכה של אינטראקציות חלבונים-חלבונים באמצעות טכניקת העיכול האנטי-ממברנה

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026