אינטראקציה הידרופילית כרומטוגרפיה נוזלית: טכניקה להפרדת אנליטים קוטביים הידרופיליים באמצעות חרוזים הידרופיליים

כרומטוגרפיה נוזלית של אינטראקציה הידרופילית, HILIC, היא טכניקה להפרדת תרכובות קוטביות הידרופיליות על סמך מידת הקוטביות שלהן. התחל בהקמת עמוד HILIC עמוס בחרוזים הידרופיליים הנושאים קבוצות פונקציונליות קוטביות.

ראשית, התנו את העמודה באמצעות מאגר שיווי משקל ושלב נייד - תערובת של ממס אורגני ומים. מולקולות החיץ מייצבות את ה-pH, בעוד שממס אורגני מרווה את העמודה. מולקולות המים משתקות ויוצרות שכבה מימית מעל החרוזים ההידרופיליים.

טען את הדגימה המכילה תערובת של גליקנים - תרכובות קוטביות הידרופיליות - המסומנות בתג פלורסנט. הפעל את הדגימה באמצעות שיפוע פאזה נייד דרך העמודה בקצב זרימה אופטימלי.

כאשר הדגימה נעה לאורך השלב הנייד ההידרופובי, הגליקנים נודדים לשכבה המימית ומשאירים אחריהם את הזיהומים. לאחר מכן, גליקנים נעים לעבר הקבוצות הפונקציונליות הקוטביות על החרוזים. כאן, יותר גליקנים קוטביים נקשרים חזק, בעוד שפחות קוטביים נקשרים באופן רופף.

ככל שההידרופוביות של הפאזה הניידת יורדת, גליקנים קשורים חלש עם פחות קוטביות וזמן שמירה קצר יותר מתפוגגים תחילה. לעומת זאת, גליקנים קשורים חזק עם קוטביות גבוהה יותר וזמן שמירה ארוך יותר.

לבסוף, גלאי מזהה את האות הפלואורסצנטי של השברים המנופחים, המתאים לפסגות הגליקן הסטנדרטיות בכרומטוגרמה.

ראשית, פתח את התוכנה כדי לשלוט בשלבים הניידים. שטפו מכשירי UPLC עם 50% מ