אי הכללת גודל הפרדה מבוססת כרומטוגרפיה של שלפוחיות חוץ-תאיות חיידקיות: טכניקה להפרדת אוכלוסייה הטרוגנית של בועיות קרום חיצוני של חיידקים גראם-שליליים בהתבסס על גודלן

0 צפיות4:51 דק' • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בתנאי תרבית מתאימים, חיידקים גראם-שליליים משחררים שלפוחיות ממברנה חיצוניות נושאות מטען, או OMVs, לתוך הסופרנטנט. שלפוחיות אלה הן מבנים כדוריים קטנים בגודל הטרוגני, המתווכים תקשורת סלולרית.

כדי לפצל תת-אוכלוסיות בגודל שונה של OMVs, קח עמודת כרומטוגרפיה ריקה עם מסנן מתאים בבסיסה כדי לתמוך במטריצה.

ארוז את העמודה במטריצת סינון ג'ל המורכבת מחרוזים כדוריים אינרטיים כימית בגודל נקבוביות מוגדר, מה שמבטיח שהגודל אופטימלי כדי למנוע כניסת OMV בגודל גדול. אזנו את העמודה עם מאגר מתאים כדי למנוע מהחרוזים להתייבש לטיהור מיטבי.

טען את תרבית החיידקים המכילה תת-אוכלוסיות בגודל שונה של OMVs, אגרגטים של חלבונים וחומצות גרעין בחלק העליון של העמודה. אפשר לדגימות לרוץ בכוח הכבידה.

כאשר הדגימות עוברות דרך העמודה, OMVs גדולים יותר שאינם יכולים להיכנס לנקבוביות, עוברים דרך הרווחים הבין-חלקיקיים בין חרוזי הג'ל כדי להיפלט תחילה. בינתיים, ה-OMV הקטנים יותר חודרים לנקבוביות המטריצה, לוקחים נתיב ארוך יותר ונעלמים מאוחר יותר.

בשל גודלם הקטן יותר, מצטבר החלבון וחומצות הגרעין נכנסים לנקבוביות שונות במטריצה, מה שגורם להם להיות בעלי זמן השמירה הארוך ביותר בעמודה ולהיפטר מהשברים האחרונים. אסוף פליטות OMV נפרדות ואחסן אותן לניתוח נוסף.

כדי להתחיל, השתמש במוט זכוכית כדי לערבב בקבוק מלאי של מדיום סינון ג'ל, ושפך את הנפח הנדרש למילוי העמוד בתוספת כ -50% עודף, לבקבוק זכוכית. הניחו לחרוזים להתייצב, ושפכו את עודפי הנוזלים. השעו מחדש את החרוזים במאגר הפליטה לתמיסה סופית של כ-70% ג'ל ו-30% מאגר, ושחררו את התמיסה בוואקום.

הרכיבו את העמוד על מעמד טבעת במצב אנכי, ומלאו את העמוד במאגר פליטה כדי להרטיב את הקירות, לפני ניקוז המאגר עד שיישאר רק כסנטימטר אחד. לאחר מכן, פיפטה בזהירות את חרוזי הג'ל לתוך העמוד, תוך ניקוז המאגר העודף כדי למנוע את שקיעת החרוזים, עד שהעמוד נארז לגובה של כ -2 סנטימטרים מתחת לתחתית מאגר העמודים.

לפני טעינת הדגימה, הסר את מאגר הפליטה בוואקום. שטפו את העמוד בערך פי שניים מנפח העמודה של מאגר הפליטה. לאחר שהמאגר מגיע לחלק העליון של שכבת הג'ל, הוסף בזהירות 2 מיליליטר של דגימת שלפוחית ממברנה חיצונית של 100 עד 200 ננומול לליטר על גבי שכבת הג'ל מבלי להפריע למשטח, ותן לדגימה להיכנס לג'ל.

לאט, הוסף את מאגר הפליטה לעמודה מבלי להפריע לשכבת הג'ל, והניח צינור של 50 מיליליטר מתחת לעמוד. כדי למנוע את התייבשות העמודה, הוסף בו-זמנית מאגר פליטה לראש העמודה.

לאחר איסוף 20 מיליליטר פליטה, הניחו מתלה של צינורות 1.5 מיליליטר מתחת לעמוד. אסוף בסך הכל 96 שברים של 1 מיליליטר בכל צינור. בזמן איסוף הדגימות, הוסף ברציפות מאגר פליטה לעמודה. כדי לנקות את העמודה, העבירו נפח עמודה אחד של 0.1 נתרן הידרוקסיד מולארי דרך העמודה, ואחריו 2 נפחי עמודה של מאגר פליטה.

10:55

בנייה של גיליונות מודולרי Hydrogel לאדריכלות סלולרית 3D המוקטן מאקרו micropatterned

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:30

תרבות משלוח Cell mesenchymal סטרומה ב עצמי תנאים: גישה חכמה עבור יישומים אורתופדיות

סרטונים קשורים

0 צפיות

05:05

הכנת רקמות לב מהונדסות בצורת רשת נגזר תאי iPS אנושיים לתיקון שריר הלב Vivo

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:24

בידוד שלפוחיות חיידקיות חוץ-תאיות באמצעות כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל

סרטונים קשורים

0 צפיות

04:38

טכניקת כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל לטיהור שלפוחיות חוץ-תאיות מיקובקטריאליות

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:26

כרומטוגרפיה של אי-הכללת גודל לניתוח הטרוגניות ארסית קרום החיצוני של חיידקים

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:56

בידוד וטיהור מדרגיים של שלפוחיות חוץ-תאיות מ-Escherichia coli וחיידקים אחרים

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:44

בידוד ואפיון של שלפוחיות חוץ-תאיות ציאנובקטריאליות

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:46

כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל להפרדת שלפוחיות חוץ-תאיות ממדיית תרבית תאים מותנית

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:29

מיקובקטריום שחפת העשרת שלפוחית חוץ-תאית באמצעות כרומטוגרפיית אי-הכללת גודל

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026