אינטראקציה הידרופובית תלוית בוטיל כרומטוגרפיה נוזלית: טכניקה לאפיון הצמדות נוגדנים-תרופות בהתבסס על אינטראקציות הידרופוביות

צימודי נוגדנים-תרופות - ADCs - נוצרים על ידי הצמדת נוגדן חד שבטי ספציפי למטרה עם תרופות ציטוטוקסיות באמצעות מקשרים מתאימים. תהליך הצימוד הסטוכסטי יוצר ADCs עם מספר שונה של חלקי תרופות.

מיני ה-ADC מאופיינים ביחס התרופה לנוגדנים שלהם או DAR, הקובע את יעילותם הטיפולית. ההידרופוביות של ADCs הופכת אותם למועמדים מתאימים לאינטראקציה הידרופובית, כרומטוגרפיה נוזלית או אפיון מבוסס HIC.

כדי להתחיל, הרכיבו עמודת כרומטוגרפיה המכילה שלב נייח מבוסס מטריצת אגרוז. המטריצה מקושרת לחלקי בוטיל - הקבוצות הפונקציונליות ההידרופוביות של אלקיל. איזון העמוד עם מאגר קשירת מלח גבוה. עקוב אחריו על ידי טעינת פתרון ה-ADC על העמודה.

יוני מלח במאגר עוקרים מולקולות מים סביב ADCs, וחושפים את האזורים ההידרופוביים שלהם. זה מאפשר ל-ADCs להיקשר לליגנדים של בוטיל באמצעות אינטראקציות הידרופוביות. ADCs עם מספר גבוה יותר של חלקי תרופות קשורים מראים אינטראקציה חזקה יותר עם העמודה.

החלף לאט את מאגר המלח הגבוה במאגר הפליטה בעל ריכוז מלח נמוך. תהליך זה של ירידה הדרגתית בריכוז המלח נקרא פליטת שיפוע.

הירידה ביוני המלח מאפשרת מחדש למולקולות מים להקיף ADCs, ומשבשת את האינטראקציה שלהן עם ליגנדים. ADCs עם המספר הנמוך ביותר של חלקי תרופות קשורות נמחקים ראשונים, ואחריהם מינים עם DAR גבוה יותר.

עקוב אחר הפליטה כדי לאפיין את ממירי ה-ADC בהתאם ל-DAR שלהם.

כדי לנתח את המצומץ, אזנו את עמודת HPLC-HIC עם מאגר 100% מלח גבוה למשך 5 דקות. לאחר מכן, ערבבו 15 מיקרוליטר של תמיסה של 1 מ"ג/מ"ל של טרסטוזומאב המקושרת ל-MMAE, עם 15 מיקרוליטר של מאגר מלח גבוה פי 2 בבקבוקון. הזרקו את התערובת על עמוד ה-HPLC. יש לשטוף בזרימה איזוקרטית של 1 מ"ל/דקה עם מאגר 100% גבוה במלח למשך דקה אחת.

לאחר מכן עם שיפוע של 15 דקות מ-100% ל-0% של מאגר עתיר מלח במאגר דל מלח. עקוב אחר הפליטה ב-280 ננומטר. שלב את הפסגות בכרומטוגרמה עם זמני שמירה של 7.5, 9.2 ו-11.5 דקות, המקבילים לטרסטוזומאב עם אפס, אחד ושני רעלים מצומדים בהתאמה.

כעת, חישבו את ה-DAR על ידי חיבור שטחי הפסגות ב-9.2 דקות, שמשקלן 1, ו-10.5 דקות, שמשקלן 2, וחלקו בשטח הכולל של שלוש הפסגות.