אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:04 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לנתח את ריכוז האתנול - תרכובת אורגנית נדיפה, התחל בנטילת תרבית העובר ההומוגנית של דג הזברה שטופל באתנול בבקבוקון כרומטוגרפיה. הסופרנטנט מכיל תרכובות אורגניות אחרות שאינן נדיפות בנוסף לאתנול. הנח את הבקבוקון האטום ביחידת דגימה של מכלול כרומטוגרפיה וחמם אותו בטמפרטורה מתאימה.
במהלך החימום, אתנול מתאדה ונודד לשלב הגז או לחלל הראש, ומשאיר אחריו את השאריות הלא נדיפות. זה מאפשר לדוגם להכניס אתנול גזי לזרם רציף של גז נשא. זה משמש כשלב נייד.
אתנול עובר דרך עמודת הכרומטוגרפיה המפותלת שחוממה מראש, המכילה מצע ארוז של השלב הנייח הנוזלי. בשל התנודתיות והקוטביות שלהן, מולקולות האתנול הנעות מתחילות לספוג על חלקיקי פאזה נייחים, ומחלקות את עצמן לפאזה הנייחת.
בשל טמפרטורת העמודה הגבוהה, הספיחה של מולקולות אתנול אינה יציבה וזמנית, ומאפשרת למולקולות אלו לספוג בהדרגה ולנדוד לאורך זרימת הגז הנשא. מולקולות אתנול אלו עוברות סדרה של אירועי ספיחה-ספיגה לאורך העמודה.
לאחר מכן, אתנול נכנס לתא זיהוי המסייע בקביעת ריכוזו בדגימה המתאימה לאזור שמתחת לעקומה בכרומטוגרמה המתקבלת.
השתמש בשני מיקרופיפטות p200 המוגדרות ל-50 מיקרוליטר, ושאבו את תמיסת קוקטייל הפרוטאז לאחת, ומים לשנייה. לאחר מכן, הניחו במהירות 10 עוברים בצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר באמצעות פיפטה מזכוכית וסגרו את המכסה. חזור על תהליך זה עבור
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים