כרומטוגרפיית גז Headspace: טכניקה להערכת ריכוז אתנול בעוברים של דגי זברה

כדי לנתח את ריכוז האתנול - תרכובת אורגנית נדיפה, התחל בנטילת תרבית העובר ההומוגנית של דג הזברה שטופל באתנול בבקבוקון כרומטוגרפיה. הסופרנטנט מכיל תרכובות אורגניות אחרות שאינן נדיפות בנוסף לאתנול. הנח את הבקבוקון האטום ביחידת דגימה של מכלול כרומטוגרפיה וחמם אותו בטמפרטורה מתאימה.

במהלך החימום, אתנול מתאדה ונודד לשלב הגז או לחלל הראש, ומשאיר אחריו את השאריות הלא נדיפות. זה מאפשר לדוגם להכניס אתנול גזי לזרם רציף של גז נשא. זה משמש כשלב נייד.

אתנול עובר דרך עמודת הכרומטוגרפיה המפותלת שחוממה מראש, המכילה מצע ארוז של השלב הנייח הנוזלי. בשל התנודתיות והקוטביות שלהן, מולקולות האתנול הנעות מתחילות לספוג על חלקיקי פאזה נייחים, ומחלקות את עצמן לפאזה הנייחת.

בשל טמפרטורת העמודה הגבוהה, הספיחה של מולקולות אתנול אינה יציבה וזמנית, ומאפשרת למולקולות אלו לספוג בהדרגה ולנדוד לאורך זרימת הגז הנשא. מולקולות אתנול אלו עוברות סדרה של אירועי ספיחה-ספיגה לאורך העמודה.

לאחר מכן, אתנול נכנס לתא זיהוי המסייע בקביעת ריכוזו בדגימה המתאימה לאזור שמתחת לעקומה בכרומטוגרמה המתקבלת.

השתמש בשני מיקרופיפטות p200 המוגדרות ל-50 מיקרוליטר, ושאבו את תמיסת קוקטייל הפרוטאז לאחת, ומים לשנייה. לאחר מכן, הניחו במהירות 10 עוברים בצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר באמצעות פיפטה מזכוכית וסגרו את המכסה. חזור על תהליך זה עבור כל הדגימות שייבדקו, בקרות ועוברים שטופלו באתנול.

עבדו עם דגימה אחת בכל פעם, פתחו במהירות את המכסה ושאבו את כל שאריות העובר עם מיקרופיפטה p200 המוגדרת ל-200 מיקרוליטר. במהירות, אך בעדינות, מוסיפים ומסירים את 50 המיקרוליטר של המים, לאחר מכן, מוסיפים את 50 המיקרוליטר של קוקטייל הפרוטאז, וסוגרים את מכסה הצינור.

הניחו לדגימה לשבת במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן, הוסיפו במהירות 450 מיקרוליטר של 5 נתרן כלורי טוחן, וסגרו את מכסה הצינור. הומוגניזציה של הדגימה על ידי מערבולת למשך 10 דקות, והעברת 2 מיקרוליטר של סופרנטנט לבקבוקון כרומטוגרפיה של גז. אטום את הבקבוקון עם מכסה פוליטטרפלואורואתילן.

לאחר השלמת שיטת ההפעלה, טען 436 זרם spme אתנול 2013 3 דקות לספוג 2_5min ריצת rg. METH מתפריט השיטות בתוכנת הניתוח עבור כל דגימה ברשימת הדגימות. מלא את רשימת הדגימות, החל מהאוויר, המים ו-5 קוקטייל פרוטאז נתרן כלוריד טוחן. לאחר מכן, הזן את תקני האתנול לפי הסדר בין 0.3125 ל -40 מילימולר.

עקוב אחר הסטנדרטים עם סיבוב החסר השני. הזן את כל דגימות העובר ההומוגניות לבדיקה, מריכוז האתנול החזוי הנמוך ביותר לגבוה ביותר, וסיים בהזנת סבב שלישי של ריקים.

הוסף את בקבוקוני כרומטוגרפיית הגז לדגימה האוטומטית לפי סדר הזנת הדגימות, ואפשר להם להתחמם במשך 10 עד 15 דקות. לאחר מכן, התחל את הפעלות הדוגמה באמצעות התוכנה. לאחר השלמת כל ההפעלות הפעל את שיטת הכיבוי על-ידי הוספת דוגמה סופית ברשימת הדוגמאות והפעלת המתנה. מת'. גבה את כל הנתונים שנרכשו במהלך הפעלת הדגימה.

לאחר השלמת שיטת הכיבוי, לחץ על פתח כרומטוגרמה ופתח את התיקיה עם התוצאות. דוגמאות משולבות אוטומטית בתוכנית זו. בתוצאות, ודא שהפסגות הנכונות שולבו. לאחר אישור כל הדגימות, הדפס או ייצא את התוצאות.

שרטט את גובה השיא של תקני האתנול בגרף. לאחר מכן, חשב את ערכי השיפוע, חיתוך ה-Y וה-R בריבוע. השג את ערך האתנול עבור כל דגימה על ידי הפחתת גובה השיא של הדגימה מיירוט ה-Y של התקנים, וחלוקת ערך זה בשיפוע התקנים.

כדי לחשב את ריכוז האתנול בעוברים, חשב את גורם הדילול עבור כל דגימה, והכפל את ערך האתנול של הדגימה בגורם דילול זה. לבסוף, חשב דגימות ייחוס מדיה על ידי הכפלת ערך אתנול המדיה במקדם דילול של 10.