נתרן דודציל סולפט פוליאקרילאמיד ג'ל אלקטרופורזה לניתוח חלבונים: טכניקה להפריד ולדמיין חלבונים על בסיס משקל מולקולרי

התחל בטיפול בדגימת החלבון עם מאגר דנטורינג המורכב מחומר ניקוי - נתרן דודציל סולפט, SDS, וחומר הפחתה - בטא-מרקפטואתנול. מחממים אותו לזמן קצר. במהלך שלב זה, בטא-מרקפטואתנול משבש את קשרי הדיסולפיד, ויוצר קונפורמציה פרושה לחלבון.

החלבונים שנפרשו עם חומצות האמינו ההידרופוביות החשופות שלהם נקשרים ל-SDS הטעון שלילי ורוכשים מטען שלילי אחיד. הוסף צבע מעקב מתאים לדגימה להדמיה בזמן אמת.

כעת, טען את הדגימה ואת סמן הגודל המולקולרי הסטנדרטי בבארות נפרדות הקיימות בג'ל הערימה - השכבה העליונה של ג'ל הפוליאקרילאמיד המכילה ריכוז נמוך יותר של פולימרים אקרילאמידים צולבים.

חבר את מנגנון הג'ל המלא במאגר לאספקת החשמל.

בנוכחות שדה חשמלי, חלבונים טעונים שלילית נודדים בחופשיות לכיוון האנודה ונערמים יחד כדי להיכנס לג'ל הפתרון - השכבה התחתונה המכילה ג'ל בריכוז גבוה יותר.

בג'ל הממיס, חלבונים מתחילים לנדוד בהתאם לגודלם המולקולרי, כאשר חלבונים קטנים יותר נודדים במהירות, וכתוצאה מכך רצועות חלבון שנפתרו בצורה אופטימלית. לאחר מכן, עצור את הריצה והסר את הג'ל.

צבעו את הג'ל בצבע אניוני, כחול Coomassie, שנקשר אלקטרוסטטית לחומצות האמינו הבסיסיות בחלבונים, ומעניק להן צבע כחול. לאחר מכן, יש להסיר את הג'ל בתמיסת חומצה אצטית להדמיה טובה יותר.

הסר את הג'ל וזהה את החלבונים המופרדים על סמך המשקל המולקולרי המשוער שלהם.

הכן שני ג