אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:34 דק׳ • July 8th, 2025
כדי להתחיל, קח דגימה המכילה אוליגונוקלאוטידים של RNA זרחניים ולא זרחניים המסומנים באופן פלואורסצנטי מעורבבים עם צבע הטעינה המכיל אוריאה. מחממים את הדגימה.
אוריאה - דנטורנט חזק - בשילוב עם החום מנטרל את מבנה ה- RNA המשני, וכתוצאה מכך הקונפורמציה הליניארית והלא מובנית שלו. כעת, יצוק את הג'ל על ידי ערבוב תמיסת אקרילאמיד-ביסקרילאמיד עם אוריאה.
הוסף טטרמתילן דיאמין, זרז, ואמוניום פרסולפט, חומר מחמצן, כדי להקל על פילמור הג'ל שלאחר מכן.
שופכים את התמיסה למנגנון קלטת שהורכב מראש. הכנס מסרק, וצור בארות לטעינת דגימה. אפשר לג'ל להתפלמר. הנח את הקסטה במנגנון הג'ל. הוסף חיץ רץ למאגרים העליונים והתחתונים, תוך שמירה על זרימת הזרם דרך הג'ל כולו. הסר את המסרק.
טען את הדגימה המעורבבת בצבע הדמיה לבאר וחבר את הג'ל לאספקת חשמל במתח הרצוי. האוריאה בג'ל מאפשרת למולקולות RNA לנדוד כמינים ליניאריים.
הג'ל פועל כמסננת, ומאפשר למולקולות ה-RNA הטעונות שלילית לנוע דרך הנקבוביות לעבר האלקטרודה החיובית. במהלך הריצה, ה-RNA הזרחני שלילי יותר מטבעו נע מהר יותר מ-RNA שאינו זרחני.
דמיין את הג'ל לזיהוי RNA עם תווית פלואורסצנטית. שימו לב לשינוי הניידות בין ה-RNA הזרחני הנודד מהר יותר, המופיע כרצועה נמוכה יותר בהשוואה ל-RNA הלא זרחני.
להכנת תמיסת ג'ל אקרילאמיד 15%, שלבו 22.5 מיליליטר של תמיסת אקרילאמיד/ביס-אקרילאמיד מעור
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים