אלקטרופורזה ג'ל פוליאקרילאמיד מקורי כחול: טכניקת הפרדה ללא דנטורינג לניתוח קומפלקסים שלמים של שרשרת הנשימה המיטוכונדריאלית

כדי לנתח את חמשת הקומפלקסים המיטוכונדריאלים של שרשרת הנשימה עם יחידות משנה שלמות, השג קומפלקסים מיטוכונדריאלים מסיסים בחומר ניקוי עדין ולא יוני. יש לערבב עם חוצץ המכיל Coomassie Blue-G, צבע אניוני.

קומאסי מחליף את חומר הניקוי ונקשר באופן לא ספציפי למתחמים, מעניק מטען שלילי ומכתים אותם בכחול. בנוסף, Coomassie מונע את הצטברות הקומפלקסים ומסייע בשימור המבנה והתפקוד המקוריים שלהם.

במיכל אלקטרופורזה, הרכיבו קלטת ג'ל הכוללת ג'ל לפתרון שיפוע עם גודל נקבוביות הולך ופוחת לאורכו, ומעליו ג'ל ערימה גדול בגודל נקבוביות. מלאו את תאי האנודה והקתודה באנודה צוננת ובמאגר קתודה המכיל קומאסי.

טען את הבארות בתערובת קומפלקס חלבון קשור של Coomassie. התחל אלקטרופורזה.

קומפלקסי החלבון הטעונים שלילית נודדים מג'ל הערימה לג'ל מפרק השיפוע, לעבר האנודה הטעונה חיובית. בעוד קומפלקסים קטנים יותר עוברים במהירות דרך הנקבוביות, קומפלקסים גדולים יותר מואטים על ידי גדלי נקבוביות מגבילים כשהם נעים במורד הג'ל הפירוק.

Coomassie המנותק מהקומפלקסים במהלך הריצה מוחלף על ידי Coomassie במאגר קתודה, ומונע מהקומפלקסים לזוז ממיקומם בג'ל. לאחר אלקטרופורזה, דמיין את הג'ל. הקומפלקסים המיטוכונדריאלים מופיעים כרצועות כחולות שנפתרו בהתאם לגודל.

קומפלקס II עם המשקל המולקולרי הנמוך ביותר תופס את המיקום הנמוך ביותר בג'ל, ואחריו קומפלקס IV